刘志国
- 作品数：67 被引量：99H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 一种猪ICSI操作的方法
- 本发明公开了一种猪ICSI操作的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)用脂酶或脂酶溶液水解离体动物精液的精子，收集水解产物，得到用于制备ICSI受精卵的精子。(2)将所述用于制备ICSI受精卵的精子注射到离体卵母细胞中，...
- 李奎刘志国魏迎辉
- 识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用
- 本发明提供了识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用。该sgRNA特异性识别猪eIF4G1基因的sgRNA识别猪eIF4G1基因的第16外显子，且用于CRISPR/Cas9系统，含有如序列1、序列2和序列3...
- 刘志国牟玉莲李奎
- CD163基因敲除iPAMs的构建及其感染PRRSV的特征分析
- 2024年
- [目的]获得分化抗原163(cluster of differentiation 163,CD163)基因敲除的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并从细胞水平研究CD163蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵过程中的作用。[方法]将靶向CD 163基因第7外显子的sgRNA质粒(pX330-sgCD163)转染至iPAMs,转染48 h后通过有限稀释法筛选单克隆细胞并进行基因型鉴定,通过Western blotting和脱靶分析来筛选CD 163基因敲除的iPAMs;通过实时荧光定量PCR、Western blotting、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和半数细胞培养物感染量(50%tissue culture infective dose,TCID 50)等试验分析CD 163基因敲除的iPAMs感染PRRSV的特征。[结果]测序结果表明,100株单克隆细胞中有1株CD 163双等位基因敲除的iPAMs,敲除效率为1%;Western blotting结果显示,CD 163基因敲除的iPAMs中检测不到CD163蛋白的表达,且在预测的脱靶位点未检测到脱靶效应。实时荧光定量PCR结果表明,与野生型iPAMs组相比,CD 163基因敲除的iPAMs组病毒拷贝数极显著降低(P<0.01);Western blotting和IFA结果表明,在接毒24 h后的CD 163基因敲除的iPAMs组中未检测到PRRSV-N蛋白的表达;TCID 50试验结果同样显示,在CD 163基因敲除的iPAMs组中未观察到细胞病变。[结论]本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统成功构建了CD 163基因敲除的iPAMs,该细胞系可以完全抵抗PRRSV感染。该细胞系的建立为后续研究PRRSV与CD163蛋白的互作机制提供了新型试验材料。
- 董泽霞林鑫周期律王楠黄雷刘志国冯政牟玉莲
- 特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用。特异性识别猪COL1A1基因的gRNA中负责识别靶片段区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示序列，本发明...
- 李奎牟玉莲刘志国樊自尧向光明
- 文献传递
- 一种对目标基因进行干扰的系统和方法
- 本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种对目标基因进行干扰的系统和方法。本发明提供的对目标基因进行干扰的系统，包括dCpf1‑PS融合蛋白、具有PS转座酶识别序列对的Donor载体，以及引导RNA。可以实现转基因序列...
- 刘志国牟玉莲李奎刘颖
- 文献传递
- 猪脂肪酸组成相关的分子标记和基因及应用
- 本发明提供了一种猪脂肪酸组成相关的分子标记和基因及应用，涉及生物技术领域。猪脂肪酸组成相关的分子标记为位于猪MSTN基因内含有如SEQ ID NO.1所示序列的片段，猪脂肪酸组成相关基因为猪MSTN基因缺失含有如SEQ ...
- 李奎樊自尧牟玉莲刘志国张艳敏吴添文徐奎
- 文献传递
- 一种提高猪体细胞核移植效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法。本发明提供了一种构胚胎培养液，其中含有50nM BIX‑01294和0.5nM毛壳素。所述胚胎培养液可以用来培养重构胚胎和/或制备用于培养重构胚胎的试剂盒。本发明通过在PZM...
- 刘志国李奎牟玉莲郑新民毕延震
- 文献传递
- 大豆卵磷脂对猪精液4℃保存质量的影响被引量：5
- 2018年
- 为了研究大豆卵磷脂对猪精液4℃保存质量的影响,试验通过手握法采集健康种公猪精液,以常规稀释液为对照组,在常规稀释液中分别添加0. 3,0. 6,0. 9 g/L大豆卵磷脂为1组、2组、3组,在4℃下低温保存,测定精子有效存活时间、总存活时间、活力、质膜完整性。结果表明：大豆卵磷脂可显著提高猪精液4℃保存效果; 1组、2组、3组精子质量指标均显著优于对照组（P〈0. 05）,其中0. 6 g/L添加组精子质量显著优于0. 3,0. 9 g/L添加组。说明在常规稀释液中添加0. 6 g/L大豆卵磷脂能显著提高猪精液4℃保存效果。
- 刘鑫崔茂盛刘朝阳付永利周伟良刘志国穆淑琴李千军
- 关键词：大豆卵磷脂精液4℃保存
- 特异性识别猪Wip1基因的成套sgRNA及其应用和产品
- 本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪Wip1基因的成套sgRNA及其应用和产品。该成套sgRNA包括Wip1‑sgRNA1和Wip1‑sgRNA2，其特异性强，可以显著减少脱靶现象，从而准确、高效...
- 牟玉莲李奎徐奎张秀玲刘志国
- 文献传递
- 一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。本发明提供了毛壳素的应用，为如下(a1)‑(a5)中的至少一种：(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液；(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液；(...
- 李奎刘志国牟玉莲郑新民毕延震
