谢秋波
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰HSP27基因表达对膀胱逼尿肌细胞收缩特性的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)低表达对体外培养人膀胱逼尿肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)肌动蛋白骨架结构及其收缩功能的影响。方法构建HSP27基因干扰慢病毒载体作用于BSMCs后,Western blot检测其抑制HSP27表达水平和干扰效率;通过鬼笔环肽荧光染色、Western blot检测BSMCs内F/G-actin比值检测等方法观察,干扰HSP27表达对BSMCs肌动蛋白骨架形态结构和聚合状态的影响;构建离体BSMCs三维培养模型,检测HSP27低表达对膀胱逼尿肌细胞收缩力的影响。结果成功构建HSP27干扰质粒p Green Puro-sh-HSP27,慢病毒载体高效感染BSMCs;与正常对照组比较,HSP27干扰组BSMCs细胞内肌动蛋白骨架结构紊乱和皱缩,检测F/G-actin比值(0.116±0.001)亦较正常BSMCs(8.717±0.500)明显下降(P<0.05);正常BSMCs三维培养模型在80 mmol/L KCl刺激下可检测到的最大收缩力为(8.4±0.6)mg显著大于HSP27干扰组[(3.8±0.2)mg,P<0.05]。结论 HSP27低表达状态可导致BSMCs肌动蛋白结构变化并导致其收缩功能受损。
- 熊智勇周鹏谢秋波卢根生王永权
- 关键词：热休克蛋白27肌动蛋白逼尿肌细胞
- 小鼠干扰素epsilon在大肠杆菌中的可溶性表达
- 2017年
- 目的构建小鼠干扰素epsilon蛋白的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得稳定的可溶性重组蛋白。方法将目的基因克隆到表达载体p ET28a-SUMO,与能同时表达3个分子伴侣gro ES、gro EL和tig的质粒p G-tf2一起转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱、Desalting柱、Q-HP柱及Superdex75分子筛层析经行纯化后,用Ulp1酶切,并对目标蛋白进行质谱分析。对目标蛋白抑制肿瘤细胞增长活性、刺激细胞产生抗病毒蛋白的活性进行鉴定。结果成功构建了重组质粒p ET28a-SUMO-IFN-ε和分子伴侣共表达,获得较多可溶性蛋白。目标蛋白酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组IFN-ε蛋白表观相对分子质量为22 000。质谱分析证实目标蛋白的序列和小鼠IFN-ε的序列吻合。小鼠IFN-ε能够抑制肿瘤细胞的生长并能诱导细胞产生抗病毒蛋白Mx A。结论小鼠IFN-ε蛋白可以和分子伴侣一起在原核系统中以可溶形式表达,并证明此蛋白具有生物学活性。
- 谢秋波常秋霜周鹏崔丽伟郭玲刘威张庆华卢根生
- 关键词：干扰素分子伴侣原核表达纯化
