雷晓波
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EV71 3C蛋白酶对肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）的切割作用研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨肠道病毒71型（EV71）编码的3C蛋白酶对于肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）的切割作用.方法 采用Western blot的方法检测EV71感染对于TRAF3蛋白表达的影响.体外转染TRAF3和3C蛋白,通过Western blot检测3C对于TRAF3蛋白的影响.通过构建3C突变体,检测其蛋白酶活性对于切割的影响.通过免疫共沉淀检测3C对于TRAF3和TRIF相互作用 的影响.结果 EV71感染细胞后可引起TRAF3蛋白的减少,其3C蛋白酶可以引起TRAF3的切割,蛋白酶活性位点突变后则不引起TRAF3的切割.位点突变试验显示TRAF3的Q242位突变后则不能被3C切割,且3C可以减少TRAF3与TRIF的结合.结论 EV71 3C蛋白酶可通过切割TRAF3机制在天然免疫逃逸中发挥作用.
- 韩宁肖霞雷晓波王健伟
- 关键词：肠道病毒71型天然免疫
- 肠道病毒71型诱导Bax依赖的细胞凋亡被引量：2
- 2011年
- 目的研究肠道病毒71型（EV71）诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用CCK8比色法检测EVT1感染对于人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响，通过Hoechst33342染色和Caspase3活性测定检测细胞凋亡特征，用WesternBlot方法检测凋亡相关蛋白Caspase3和8的激活。同时通过免疫共沉淀检测EV71感染后细胞内Bax的活化。结果EV71感染RD细胞可以明显抑制细胞增殖，引起Caspase3、8和PARP蛋白的激活，同时引起Bax蛋白表达增加并发生构象变化。结论EV71通过Bax构象变化诱导Caspase依赖的细胞凋亡。
- 孙振民肖艳任丽丽雷晓波王健伟
- 关键词：肠道病毒属细胞凋亡
- TRIM38蛋白对核转录因子NF-κB的影响被引量：1
- 2011年
- 目的TRIM家族是一类结构保守的蛋白家族，目前发现其包含70多种成员，参与了增值、分化、细胞凋亡及病毒与宿主的免疫应答等。TRIM38的功能尚不清楚。本研究拟通过实验确证TRIM38对核转录因子NF—KB活性的调节。方法在293T细胞中过表达TRIM38，采用荧光素酶报告系统检测TRIM38及其结构与缺失突变体对NF—KB启动子活性的影响。用WesternBlot方法检测TRIM38蛋白的表达。结果TRIM38可以激活NF—KB，并且在构建的TRIM38保守结构域的缺失突变体中，只有SPRY结构域缺失后不影响TRIM38的功能。结论TRIM38是一个不依赖于SPRY结构域的NF—KB的激活蛋白。
- 刘新蕾雷晓波王健伟洪涛
- 关键词：转录因子基因
- PEF1在肠道病毒71型复制中的作用研究
- 2019年
- 目的探讨PEF1(penta-EF-hand domain containing 1)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)复制和感染的影响。方法采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)方法,敲低人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma,RD)中PEF1的表达,通过RT-PCR、蛋白免疫印迹(western blot,WB)实验检测siRNA的效率。通过RT-PCR、WB和空斑实验检测并比较对照细胞和PEF1敲低细胞中EV71的复制水平。利用免疫荧光检测EV71感染后PEF1在细胞中的定位。采用CRISPR-Cas9技术构建PEF1敲除的RD细胞系,并通过测序和WB实验验证敲除效果,同时使用WB实验检测PEF1敲除的细胞中EV71的复制。结果siRNA能够显著降低RD细胞中PEF1的表达。EV71在PEF1敲低的细胞中的复制水平低于对照细胞。EV71感染后细胞内PEF1的表达水平并未发生改变,但是在细胞内的定位发生了改变。PEF1敲除细胞中EV71的复制水平也显著降低。结论敲低或敲除PEF1的表达能抑制EV71的复制,EV71感染并不影响PEF1的表达但改变其在细胞内的定位。
- 董思文肖霞齐建利雷晓波王健伟
- 关键词：肠道病毒71型病毒复制DOMAINCONTAINING
