韩春耀 作品数:3 被引量:4 H指数:2 供职机构: 辽宁医学院附属第一医院 更多>> 发文基金: 辽宁省科技厅自然科学基金 辽宁省科学技术计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立 被引量:2 2016年 目的:设计并构建α-catulin-shRNA表达载体,建立沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌(TSCC),TSCCA细胞模型并观察其沉默效率,为TSCC的基因治疗提供依据。方法:TSCCA细胞分为转染组(转染shcatu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4质粒)、阴性对照组(转染sh-nc质粒)及空白对照组(未处理)。根据GenBank上获取的α-catulin mRNA序列,设计并合成4条α-catulin-shRNA质粒表达载体。测序鉴定后,经脂质体介导,将3组质粒分别转染至体外培养的人TSCCA细胞中,荧光显微镜观察各组TSCCA细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;采用RT-PCR和Western blotting法检测TSCCA细胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相对表达水平及沉默效率。结果:测序鉴定表明成功构建了编码α-catulin的shRNA质粒表达载体sh-catu1、shcatu2、sh-catu3和sh-catu4;转染TSCCA细胞后,荧光显微镜下观察到表达载体在细胞中成功表达。RT-PCR检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05)。结论:成功构建α-catulin-shRNA重组质粒载体,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA细胞模型,为研究α-catulin基因在TSCC发病机制中的作用提供了细胞模型。 韩春耀 张斌 马雪 刘明媛 薛中原 郝丽静 葛树卿关键词:舌肿瘤 细胞转染 特异性沉默α-catulin基因的表达对舌鳞状细胞癌TSCCA细胞增殖和凋亡的影响 2016年 目的:探讨α-catulin基因对人舌鳞状细胞癌(TSCC)TSCCA细胞增殖和凋亡的影响,阐明α-catulin在TSCCA细胞生物学行为中的作用。方法:取对数生长期的TSCCA细胞,分为α-catulin-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组。RT-PCR法检测各组TSCCA细胞中α-catulin mRNA相对表达水平;Western blotting法检测各组TSCCA细胞中α-catulin蛋白的相对表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测各组TSCCA细胞凋亡率。结果:RT-PCR检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulin mRNA相对表达水平降低(P<0.01),且随着时间的相对延长,α-catulin mRNA相对表达水平逐渐降低,72h时其相对表达水平低于24和48h时(P<0.01)。Western blotting法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。MTT法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞生长抑制率升高(P<0.001)。流式细胞术检测,与空质粒对照组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞凋亡率升高(P<0.001)。结论:特异性沉默α-catulin基因的表达可抑制TSCC的TSCCA细胞的增殖,促进其凋亡。 马雪 张斌 韩春耀 刘明媛 郝丽静 葛树卿 薛中原关键词:舌肿瘤 细胞增殖 下调α-catulin基因的表达对舌鳞癌细胞株Tscca侵袭及迁移能力影响的体外研究 被引量:2 2016年 目的探讨α-catulin基因下调对人舌鳞癌细胞株Tscca侵袭、迁移能力的影响。方法本实验设为3个组:α-catulin-siRNA组、空质粒转染组和未转染质粒的空白对照组。构建α-catulin沉默质粒转染的人舌鳞癌细胞株Tscca,运用Western blotting检测α-catulin蛋白表达,采用Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力。结果 Western blotting结果显示,α-catulin-siRNA转染组Tscca细胞α-catulin蛋白表达量减少;Transwell及划痕实验结果显示,α-catulin-siRNA转染组细胞侵袭、迁移能力降低。结论下调α-catulin基因的表达可以有效降低人舌鳞癌细胞株Tscca的侵袭、迁移能力,α-catulin有望成为舌癌基因治疗的一个潜在靶点。 马雪 张斌 韩春耀 刘明媛 郝丽静 葛树卿 薛中原关键词:舌癌 迁移