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龚双燕: 作品数：19 被引量：40H指数：4; 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>; 发文基金：四川省科技支撑计划“十二五”国家科技计划农村领域国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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一例猪黄疸检出戊型肝炎病毒的案例报道被引量：1: 2017年; 戊型肝炎（Hepatitis E,HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）感染引起的一种人畜共患病。猪戊型肝炎可分为临床型和亚临床型及健康型。临床型即病猪有典型的特征性黄疸表现。病猪发病急,体温比正常猪的体温高0.5~1℃,咳嗽、鼻塞、呼吸困难、精神沉郁、食欲下降,严重的食欲废绝,有的出现呕吐、腹痛、腹胀、腹泻,尿液呈浅黄色。; 李幽幽龚双燕李小璟毛汐语邓益超朱玲徐志文; 关键词：戊型肝炎病毒人畜共患病眼结膜健康型猪群免疫

猪传染性胃肠炎病毒在低血清培养基驯化的PK-15细胞中增殖规律观察: 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)是一种高度接触性传播的急性肠道病毒,两周龄内仔猪感染伴有严重腹泻,脱水,呕吐等症状,死亡率极高。该病...; 龚双燕; 关键词：TGEV PK-15细胞 BCL-XL MCL-1 PUMA; 文献传递

猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型复合PCR方法的建立被引量：2: 2017年; 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)在腹泻仔猪中的感染状况,建立一种能同时检测PEDV与PCV2混合感染的复合PCR方法。根据Gen Bank已发表的PEDV、PCV2的基因序列,选择保守区域分别设计、合成1对特异性引物,扩增目的片段分别为530和278 bp。经反应条件优化,建立了特异性检测PEDV、PCV2的复合PCR方法。应用本试验所建复合PCR方法,对2016年4—8月采自四川省乐山、宜宾、广元和遂宁等地区的67份腹泻仔猪样品(肠系膜淋巴结、肠道黏膜及其内容物混合)进行检测。结果显示:PEDV、PCV2单一感染阳性率分别为34.33%、73.13%;PEDV+PCV2复合感染率为16.42%。经与特异性检测PCV2的PCR法和PEDV的RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。; 龚双燕李小璟陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞朱玲徐志文; 关键词：流行性腹泻病毒圆环病毒2型复合PCR

猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别被引量：2: 2018年; 为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。; 姜子义李碧蔡瑶颜久淇龚双燕樊毅黄剑波朱玲徐志文; 关键词：PRV 多重PCR 疫苗株变异株

猪戊型肝炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：7: 2017年; 目的建立一种快速检测猪戊型肝炎病毒(HEV)的方法。方法针对HEVORF2基因保守序列设计1对引物,基于SYBR GreenⅡ染料,建立了检测HEV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法只能对猪戊型肝炎病毒检测到荧光,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒均不能检测到荧光信号,特异性好;检测HEV时,在4.10×10~2~4.10×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,灵敏度可以达到1.00×10~2拷贝/μL,扩增相关系数为0.996,扩增产物的熔解温度为84.0℃±0.1℃,该检测方法组内变异系数为0.83%~0.94%,组间变异系数为0.83%~0.94%,重复性较好。利用该方法对临床61份来自四川各地的猪肠内容物进行检测,检出9份阳性,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结论建立的针对HEV的荧光定量RT-PCR有效可行,对HEV的临床检测和进一步研究奠定了基础。; 李幽幽龚双燕李小璟毛汐语邓益超朱玲徐志文; 关键词：猪戊型肝炎病毒 SYBR 荧光定量RT-PCR

四川地区一株猪塞内加谷病毒的分离鉴定及VP1基因的序列分析: 2019年; 猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)是一种新出现的小RNA病毒科病毒,感染该病毒的猪群,尤其是仔猪可能出现严重的病理症状甚至死亡。2015年之前,该病毒主要流行于美国、加拿大及巴西等地区,并于2015年3月传入中国[1],给养猪业带来了严重的经济损失。2018年2月,本实验室检测并收集了阳性病料,采用PK-15细胞对病料进行病毒分离,并通过观察细胞CPE(细胞病变效应)、RT-PCR扩增和VP1基因序列测定进行鉴定。结果显示,成功分离到四川地区第一株SVV并将其命名为CH-MS-2018。对VP1基因的扩增测序及序列分析结果表明,本次分离得到的CH-MS-2018株VP1基因与GenBank上分别于2015年分离的2株和2016年分离的3株美国株的亲缘关系较近,同源性为98.6%。而与最早分离的SVV原始株关系较远,仅为88.0%~89.8%。本研究结果为进一步探索四川地区SVV的生物学性质奠定了基础。; 陈瑛琪蔡瑶龚双燕李小璟李雨濛李幽幽徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：VP1基因

猪传染性胃肠炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用被引量：5: 2017年; 为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据Gen Bank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法。该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较。结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本。说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒荧光定量PCR检测初乳

一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道: 2017年; 2017年6月,四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状,采集发病猪的肠道、淋巴结等样品,应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明,该猪场为猪轮状病毒(Po RV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染。通过采取综合防控措施,病情得到有效控制,减少了该猪场的经济损失。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪轮状病毒猪圆环病毒2型

猪繁殖与呼吸综合征病毒对Marc145细胞自噬相关基因转录的影响及分析被引量：3: 2018年; 自噬参与多种疾病过程,且与病毒感染与增殖关系密切。为探究Marc145细胞感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后自噬相关基因Beclin1、ATG5和ATG12mRNA转录差异及规律、PRRSV增殖与细胞自噬的联系;采用实时荧光定量PCR方法对自噬相关基因Beclin1、ATG5和ATG12 mRNA的转录进行测定,绘制了转录规律曲线图;并经实时荧光定量测定并绘制PRRSV在Marc145细胞中增殖规律图。结果显示,试验组自噬相关基因转录量明显高于对照组,表明PRRSV能诱导Marc145细胞自噬,且使Beclin1、ATG5和ATG12mRNA提前进入高转录状态;其转录规律与细胞病变、PRRSV增殖规律呈正相关。; 李小璟龚双燕马海强刘丹高健彭雪朱玲徐志文; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 BECLIN1 自噬

猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究: 2019年; 为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。; 龚双燕李小璟李幽幽朱玲徐志文; 关键词：PK-15 BCL-XL MCL-1

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