李波
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金更多>>
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- 小鼠主动脉环血管新生实验模型的优化
- 2016年
- 目的：建立优化体外培养小鼠主动脉环血管新生实验模型的条件和方法。方法：分离C57BL/6小鼠的胸主动脉,剔除主动脉周围的脂肪及结缔组织,使用Ⅱ型胶原酶消化动脉,剥离血管外膜,将血管剪成0.5 mm长的动脉环,置于预先包被有鼠尾Ⅰ型胶原的96孔板中培养,给予DMEM＋2.5%胎牛血清,DMEM＋10%胎牛血清或DMEM＋2.5%胎牛血清＋血管内皮生长因子（VEGF,终浓度为50 ng/m L）100μL/孔,覆盖胶原表面。倒置显微镜下观察动脉环新生微血管。免疫荧光染色鉴定内皮细胞。结果：鼠尾Ⅰ型胶原包被的96孔板（DMEM＋2.5%胎牛血清）内新生微血管数量明显多于24孔板（t=-6.000,P〈0.05）。DMEM＋10%胎牛血清组新生微血管数量明显高于DMEM＋2.5%胎牛血清组和DMEM＋2.5%胎牛血清＋VEGF组。DMEM＋10%胎牛血清组培养24 d后小鼠主动脉环开始出芽,68 d后动脉环新生微血管分支、数量及长度达到高峰。结论：优化后的方法可以得到生长状态良好,出芽率高,纯度高的离体小鼠动脉环血管新生实验模型。
- 翁嘉懿严金川陈瑶李波李晓阳徐源刘俊
- 关键词：主动脉环血管新生
- CD137-CD137L信号通过CaM-CaN通路调控小鼠血管平滑肌细胞NFATc1表达被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨CD137-CD137L信号是否通过钙调蛋白-钙调神经磷酸酶(Calmodlin-Calcineurin,CaM-CaN)通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)的表达。方法:采用改良组织贴块法原代培养小鼠血管平滑肌细胞。实验分两部分,第一部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)和CD137抑制组(抑制型CD137抗体10μg/m L预孵30 min后+激动型CD137抗体10μg/m L);第2部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)、si CaM组(si-CaM+CD137刺激组)和si CaN组(si-CaN+CD137刺激组)。分别采用蛋白质印迹和RT-PCR检测平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1的蛋白和mRNA表达水平。结果:(1)蛋白质印迹和RT-PCR结果显示,与对照组相比,CD137刺激组小鼠平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1表达明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组CaM、CaN及NFATc1表达显著降低(P<0.05)。(2)通过si-RNA技术分别沉默CaM和CaN后,与CD137刺激组相比,si CaM组CaM、CaN及NFATc1表达水平明显降低(P<0.05);si CaN组的CaM无明显改变(P>0.05),而CaN及NFATc1表达明显降低(P<0.05)。结论:CD137-CD137L信号可能通过CaM-CaN通路调控NFATc1的表达。
- 刘俊邵晨陈蕊仲威李波王中群严金川
- 关键词：钙调蛋白钙调神经磷酸酶
- CD137-CD137L信号通路通过调控小鼠血管平滑肌细胞自噬小体出胞影响动脉粥样硬化钙化形成被引量：9
- 2017年
- 目的探讨CD137-CD137L信号通路是否通过调控自噬小体出胞影响动脉粥样硬化钙化形成。
方法（1）在体实验：载脂蛋白E基因敲除（ApoE－/－）小鼠15只，8周龄，雄性，采用随机数表法分为3组，即对照组、CD137激动组（腹腔注射激动型CD137抗体200 μg）、CD137抑制组（腹腔注射抑制型CD137抗体200 μg ＋激动型CD137抗体200 μg），每组5只，同时高脂喂养。采用Von Kossa染色法观察各组小鼠胸主动脉粥样硬化斑块钙化程度，免疫组织化学染色法观察斑块内自噬早中期标记物微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）和酵母自噬基因Atg6的同源基因Beclin1的表达，Western blot法检测LC3B、Beclin1蛋白表达，透射电镜检测斑块中自噬小体形成。（2）细胞实验：采用组织块贴壁法培养C57BL/6J小鼠（基因背景与ApoE－/－小鼠一致）胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC），将细胞分为3组，即对照组、CD137激动组（激动型CD137抗体10 μg/ml加入培养基中）、CD137抑制组（抑制型CD137抗体10 μg/ml预处理细胞30 min后，加入激动型CD137抗体10 μg/ml于培养基），细胞外钙化分别采用Von Kossa染色和成骨表型碱性磷酸酶（ALP）活性检测。（3）出胞自噬小体的分离及分组干预：将细胞实验中CD137激动组细胞经相应处理获取自噬小体。取细胞实验中的小鼠VSMC予炎症因子白细胞介素-1β、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α各25 ng/ml刺激24 h后分为激动组（自噬小体终浓度为15 μg/ml）和对照组，检测两组钙盐沉积和成骨表型标志物骨形成蛋白2（BMP2）表达情况。
结果（1）在体实验结果：CD137激动组小鼠胸主动脉粥样硬化斑块内钙化区域明显大于对照组（P〈0.01），而CD137抑制组则小于CD137激动组（P〈0.05）。CD137激动组和抑制组小鼠胸主动脉粥样硬化斑块内自噬标记物LC3B和Beclin1均为阳性表达，抑制组表达更为明显。Western b
- 李波李晓阳仲威邵晨王中群袁伟严金川
- 关键词：动脉粥样硬化抗原CD137自噬
- CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达被引量：3
- 2017年
- 目的探讨CD137-CD137L信号是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6/c-Jun氨基末端激酶/活化蛋白1(TRAF6/JNK/AP-1)途径调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。方法采用组织块原代培养小鼠VSMC,第3~5代细胞用于实验。VSMC分为6组:对照组、CD137刺激组、CD137抑制组、siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组。Western blot检测各组TRAF6、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)、NFATc1蛋白表达水平。免疫荧光法检测各组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达。结果 (1)与对照组相比,CD137刺激组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。(2)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137刺激组相比,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无明显改变,而p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05)。(3)免疫荧光检测显示:CD137刺激组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P<0.05);CD137抑制组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P<0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致。结论 CD137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响NFATc1的表达。
- 徐源王中群仲威邵晨李波刘俊李晓阳严金川
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6C-JUN氨基末端激酶活化蛋白1
