刘鹏
- 作品数:3 被引量:7H指数:1
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- 重组腺病毒介导的β-神经生长因子基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究被引量:1
- 2017年
- [目的]探究携带β-神经生长因子(β-NGF)基因的重组腺病毒转染大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)的最佳感染复数(MOI),并从基因转录和蛋白合成两个水平上观察转染后EPCs对β-NGF基因的表达,探讨其对脊髓损伤后神经元细胞微环境的影响。[方法]密度梯度离心法分离、全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓源EPCs,免疫荧光法检测EPCs特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2的表达。用不同MOI值的携带β-NGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组腺病毒转染EPCs,确定最佳的MOI值。用携带β-NGF基因的重组腺病毒转染的细胞为β-NGF基因组,用空载的重组腺病毒转染的细胞为空载组,未转染的细胞为空白组。RT-PCR法、Western blot法和ELISA法检测β-NGF的表达。[结果]成功分离、培养出大鼠骨髓源EPCs,特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2经鉴定呈阳性表达;携带β-NGF基因的重组腺病毒转染EPCs最佳的MOI为70;转染成功的细胞β-NGF基因在m RNA和蛋白两个不同的水平上表达都升高,并持续向细胞外分泌。[结论]携带β-NGF基因的重组腺病毒可成功转染EPCs,成功转染β-NGF基因的细胞能持续向细胞外分泌有活性的β-NGF蛋白。
- 刘鹏朱冬昀彭长亮马腾吴东进高春正
- 关键词:内皮祖细胞神经生长因子腺病毒
- 切割吸除法建立大鼠脊髓块状半切损伤模型及饲养护理经验
- 目的建立稳定的脊髓块状半切损伤模型,通过科学饲养护理提高术后存活率,为移植物修复脊髓损伤研究提供可靠的动物模型。切割吸除法建立大鼠脊髓块状半切损伤模型及饲养护理经验。方法60只SD大鼠随机分为特殊护理组(A组,n=30)...
- 马腾刘鹏吴东进高春正
- 关键词:护理
- siRNA抑制转化生长因子-β1对小鼠黄韧带骨化的影响被引量:6
- 2014年
- 目的运用RNA干扰(RNAi)技术抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)在小鼠黄韧带成纤维细胞中的表达,探讨其对脊柱黄韧带骨化的影响。方法培养小鼠黄韧带成纤维细胞,经人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导骨化,对骨化成功的黄韧带细胞(成骨细胞)进行形态学观察,并对其进行碱性磷酸酶(ALP)染色及钙结节茜素红染色鉴定;构建靶向TGF-β1基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体(siRNA-pSilencer2.0U6-TGFβ1)并转染成骨细胞,分为3组:真核表达载体转染后细胞为实验组,空载体转染后细胞为阴性对照组,未转染细胞为空白对照组。应用免疫荧光技术检测转染前后细胞中TGF-β1、BMP-2的表达;RT-PCR检测TGF-β1 mRNA在细胞内表达变化;Western blotting检测TGF-β1和BMP-2蛋白在细胞内表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中ALP、骨钙素(OC)水平的变化。结果经诱导骨化成功后,小鼠黄韧带细胞形态学观察可见细胞ALP染色、钙结节茜素红染色均呈阳性,具有典型成骨细胞生物学特征。构建的siRNA表达载体对细胞转染后,免疫荧光检测显示TGF-β1和BMP-2荧光强度下降;RT-PCR检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA表达分别下降41.94%、47.82%,差异有统计学意义(P<0.01);Western blotting检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1/β-action蛋白表达比值分别下降35.88%、44.75%,差异有统计学意义(P<0.01);BMP-2/β-action蛋白表达比值分别下降81.79%、86.06%,差异有统计学意义(P<0.01);ELISA检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组ALP分别下降24.14%、32.30%,差异有统计学意义(P<0.01);OC分别下降17.01%、21.63%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论构建靶向TGF-β1基因的siRNA真核表达载体能够有效抑制成骨细胞中TGF-β1以及内源性BMP-2表达,达到抑制脊柱黄韧带骨化的目的。
- 张颖哲吴东进彭长亮李波翰宋扬张程赵杰李德全杨中雁刘鹏赵坤马胜忠高春正
- 关键词:骨化骨钙素转化生长因子-Β1骨形态发生蛋白-2