杨泽宁
- 作品数：12 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省应用基础研究计划面上项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种抗EV-D68病毒的单克隆抗体及其制备和应用
- 本发明公开了一种抗EV‑D68病毒的单克隆抗体及其制备和应用。首次运用单个B细胞分离技术对EV‑D68病毒感染的恒河猴进行特异性单个记忆B细胞的分选，获得了配对的抗体轻重链基因，并进一步筛选得到具有中和活性的EV‑D68...
- 刘龙丁孙明郑惠文郭磊王晶晶李冰香李恒杨泽宁李洪哲范海涛储曼曼黄星李楠杨瑾溪吴琼雯
- 文献传递
- 一种检测血清中抗EV‑D68病毒抗体的方法
- 本发明公开了一种检测血清中抗EV‑D68病毒抗体的方法。提取EV‑D68病毒基因组RNA，通过反转录和PCR扩增反应得到VP1基因的cDNA，将其克隆到克隆载体，再将转入表达载体得到重组表达质粒，转化宿主菌并用IPTG诱...
- 刘龙丁郑惠文孙明王晶晶郭磊李冰香龙海亭李洪哲范海涛杨泽宁储曼曼黄星
- 文献传递
- 肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究被引量：1
- 2019年
- 目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。
- 郑惠文杨智尧杨泽宁宋杰黄星李楠丁丽莎李恒李洪哲郭磊储曼曼施海晶刘龙丁
- IL-6对小鼠呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探究IL-6对呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响。方法通过real-time PCR对IL-6敲除小鼠的上呼吸道鼻黏膜和下呼吸道肺组织中56种趋化因子及受体的表达谱进行芯片分析,利用流式细胞术对上下呼吸道中免疫细胞组成进行分析;再使用IL-6蛋白对野生型小鼠进行滴鼻处理,检测鼻黏膜和肺组织内趋化因子表达谱和免疫细胞组成的改变。结果IL-6敲除后小鼠肺组织CXCL5表达显著降低,鼻黏膜中T细胞占比升高,肺组织中肺泡巨噬细胞和CD4^+T细胞占比均降低;IL-6滴鼻后鼻黏膜中CCL3、CXCL2和CXCL3的表达显著升高,肺组织中总白细胞占比显著减少,除中性粒细胞占比增加外,其它免疫细胞均有减少。结论降低或升高IL-6水平均可导致呼吸系统内多种趋化因子表达以及免疫细胞组成发生改变,提示IL-6可调节呼吸系统免疫,尤其是中性粒细胞的免疫反应。
- 杨谨溪范琪琪李楠郑惠文李恒杨泽宁陈燕丽候东佩郭磊刘龙丁
- 关键词：白细胞介素-6趋化因子趋化因子受体中性粒细胞
- 利用反向遗传学技术构建H5N9重组流感病毒株被引量：1
- 2017年
- 目的利用反向遗传学技术构建来源人感染禽流感病毒H5N1和H7N9HA和NA基因的H5N9亚型禽流感病毒。方法全基因合成A／Beijing／01／2003（H5N1）禽流感病毒HA基因片段和A／Zhejiang／DTID-ZJU10／2013（H7N9）禽流感病毒NA基因片段，插入到pHW2000载体，与携带有AfPuertoRico／8／34（H1N1）的6个内部基因的pHW2000重组质粒一起转染293T和MDCK混合细胞，拯救H5N9重组病毒。结果核酸测序、HA和NA基因转录和表达检测、细胞病变分析确定利用该反向遗传学系统可以成功拯救H5N9病毒。重组H5N9病毒在MDCK细胞上复制增殖能力低于相同方法拯救H1N1病毒。结论利用反向遗传学技术成功构建一株H5N9重组病毒。
- 郭磊宁若彤王晶晶郑惠文李嘉祺范海涛李洪哲杨泽宁刘龙丁
- 关键词：反向遗传技术甲型流感病毒
- 白细胞介素1受体1和白细胞介素6双基因敲除小鼠的构建及基因型鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的通过白细胞介素1受体1 （interleukin-1 receptor1, IL-1R1）和白细胞介素6 （interleukin-6，IL-6）单基因敲除小鼠杂交繁育以获得IL-1R1-/-IL-6-/-纯合子小鼠。方法将IL-1R1＋/＋IL-6-/-和IL-1R1-/-IL-6＋/＋小鼠杂交，并进行子代自交繁殖，提取基因组DNA，PCR鉴定其自交子代基因型。并用免疫印迹法（Western blot）、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）确定自交小鼠后代基因型。
结果PCR鉴定成功获得基因型为IL-1R1-/-IL-6-/-的双基因敲除小鼠。Western blot结果显示，双基因敲除小鼠未见IL-1R1的蛋白条带；ELISA结果提示，双基因敲除小鼠的IL-6细胞因子为阴性。结论成功获得IL-1R1-/-IL-6-/-双基因敲除纯合小鼠，为深入研究IL-1R1、IL-6基因相关的炎症疾病动物模型奠定基础。
- 范海涛李恒郭磊王晶晶储曼曼黄星郑惠文杨泽宁李洪哲刘龙丁
- 关键词：基因敲除小鼠基因型鉴定
- 疫苗免疫代谢研究进展被引量：1
- 2020年
- 免疫代谢是将免疫和代谢联系起来的一个新的学科领域.疫苗研究者们发现代谢实际上在免疫调控上起着重要的作用,无论是固有免疫还是适应性免疫,免疫代谢功能正常是免疫系统正常发挥作用的前提.免疫系统的调动是疫苗发挥作用的重要过程,随着免疫代谢研究的深入,其为疫苗界开启一道新的大门,通过对免疫代谢的调控从而为疫苗研发和疫苗的改进提供一个新的思路.
- 杨泽宁刘龙丁
- 关键词：疫苗免疫反应
- 细胞自噬对甲型流感病毒H1 N1感染A549细胞过程中病毒复制及Ⅰ型干扰素表达的影响被引量：3
- 2017年
- 目的 通过研究细胞自噬在甲型流感病毒H1 N1感染细胞过程中对病毒复制及Ⅰ型干扰素表达的影响,为进一步阐明流感病毒感染机制提供实验资料.方法 利用自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）抑制细胞自噬,流式细胞术检测3-MA对细胞凋亡的影响,激光共聚焦显微镜观察H1N1感染A549细胞后的自噬现象,利用real-time PCR检测自噬被抑制前后病毒拷贝数的变化以及Ⅰ型干扰素（typeⅠinterferon,IFN-Ⅰ）产生通路各基因mRNA表达量的变化.分析细胞自噬对病毒复制及干扰素表达的影响.结果 当H1N1感染A549细胞后可诱导细胞产生不完全自噬,导致自噬体积累.当自噬被3-MA抑制后,TLR3-TLR7-MyD88-IRF7-IFN-α/β信号通路各基因mRNA表达量上调,与此同时病毒拷贝数及血凝滴度下调.结论 H1N1可能通过诱导不完全自噬逃逸了机体的抗病毒固有免疫应答,促进了自身复制和存活.
- 李嘉祺胡雅洁宋杰李洪哲王晶晶郭磊郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁刘龙丁
- 关键词：细胞自噬甲型流感病毒
- 肠道病毒-D68型流行株3C和3D蛋白结构域序列和结构特征比较分析被引量：1
- 2018年
- 目的 利用生物信息学的方法,探究不同亚型肠道病毒-D68型（EV-D68）的3C和3D非结构蛋白序列及结构是否存在差异.方法 通过将近年来世界各国EV-D68流行株（主要为中国株和美国株）的VP1核酸序列进行比对,利用邻接法（Neighbor-Joining）构建系统进化树进行分型,选取各型的代表株,利用其3C和3D蛋白的核酸序列构建进化树并同时利用其氨基酸序列进行同源建模,以进行蛋白质结构分析.结果 通过分析发现,EV-D68 Clade A、CladeB亚型毒株3D蛋白的三级结构均相同;而在3C蛋白的三级结构中,Clade B1亚型的毒株与Clade A、Clade B2和CladeB3亚型毒株存在差异.结论 3C蛋白的三级结构上的差异可能导致EV-D68 Clade B1亚型毒株的毒力和致病性高于Clade A、Clade B2和Clade B3亚型毒株.
- 杨泽宁郑惠文李嘉祺李洪哲郭磊王晶晶李恒宁若彤范海涛黄星储曼曼刘龙丁
- 关键词：病毒非结构蛋白质类基因
- 一种用于肠道菌群研究的非啮齿类动物模型的建模方法
- 本发明公开了一种用于肠道菌群研究的非啮齿类动物模型的建模方法。以12月龄雄性恒河猴为实验动物，饲喂混合抗生素21天，清除动物体内的肠道共生菌群。抗生素包括新霉素、链霉素、氨苄西林钠、卡那霉素、甲硝唑和万古霉素，饲喂前10...
- 刘龙丁李洪哲王晶晶李恒郭磊黄星范海涛杨泽宁郑惠文储曼曼
- 文献传递
