丁晨
- 作品数：15 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：协和青年科研基金云南省重点新产品开发计划云南省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用丙型肝炎病毒复制子模型检测重组人λ2干扰素的体外活性
- 2017年
- 目的:利用丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞模型,体外研究重组人λ2干扰素(hIFNλ2)对HCV复制子的抑制作用。方法:构建重组质粒pcDNA3.1-hIFNλ2-HA,转染293T细胞,表达带有HA标签的hIFNλ2,表达后的上清通过Western印迹检测,然后稀释至不同浓度后作用于带有HCV复制子的Huh7.5细胞系,每隔24h取样并更换培养液,通过报告基因检测hIFNλ2对HCV复制子的抑制作用。结果:构建了pcDNA3.1-hIFNλ2-HA真核表达重组体,并在293T细胞中表达出hIFNλ2,该蛋白能有效抑制HCV复制子的复制。结论:hIFNλ2对HCV复制子具有抑制作用。
- 张辉李亚东李亚东宫悦毕研伟丁晨宫悦
- 分光光度法标定酵母超滤液浓度及其在脑膜炎球菌培养基优化过程中的应用
- 2017年
- 目的:建立检测酵母超滤液浓度的方法,并探索适合A、C群脑膜炎球菌生长的无动物源性培养基中酵母超滤液的浓度。方法:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较确定检测酵母提取物浓度的最佳波长;用3000 Da超滤膜超滤酵母提取物溶液,制备酵母超滤液并检测其性质;观察脑膜炎球菌在含不同批次酵母超滤液的半综合培养基中的生长情况,验证不同批次标化的酵母超滤液的稳定性;配制含不同浓度酵母超滤液的半综合液体培养基,观察A、C群脑膜炎球菌的生长情况。结果:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较,确定了检测酵母提取物浓度的最佳波长为405 nm;采用3000 Da超滤膜超滤后的酵母超滤液不与CTAB产生沉淀,通过检测其D_(405nm)值,可以确定酵母超滤液的浓度;从生长情况考虑,A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度分别为4、2 mg/L。结论:建立了制备酵母超滤液及分光光度法标定酵母超滤液浓度的方法,确定了培养A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度。
- 毕研伟肖红剑丁晨闫玲梅寸韡
- 关键词：酵母提取物分光光度法脑膜炎球菌
- 一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法
- 本发明提供了一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法，如下：一、构建定点切割单链、双链核酸酶系统及同源序列；二、导入定点切割单链核酸酶系统和同源序列的细胞感染DNA病毒，待细胞病变，收集P1子代病毒；三、导入定点切...
- 寸韡李琦涵毕研伟李智华丁晨
- 文献传递
- 一种DNA病毒基因组的定点改造方法
- 本发明提供了一种DNA病毒基因组的定点改造方法，解决了现有技术诱导DNA病毒基因组定点突变困难，插入外源片段操作复杂，重组率较低的问题。将携带有核酸酶系统的质粒转染细胞后，再感染病毒，待细胞出现病变后，收集病变细胞，经冻...
- 寸韡李琦涵毕研伟孙乐高丹丹丁晨李智华肖红剑闫玲梅
- 文献传递
- 一种纯化细菌荚膜多糖的方法
- 本发明公开了一种纯化细菌荚膜多糖的方法，所述纯化方法利用非离子表面活性剂，通过相分离法纯化细菌荚膜多糖。细菌荚膜多糖疫苗的制备过程中需要尽可能多地去除杂质蛋白和内毒素，以减少疫苗的副反应。目前使用的苯酚抽提法、柱层析法以...
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- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达及活性鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为基础,在枯草芽孢杆菌中得到具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。方法:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到SplB基因,同源重组到表达载体pHTSHIS上,再转化枯草芽孢杆菌;优化诱导条件发酵枯草芽孢杆菌,离心后超滤浓缩上清液,再经镍柱分离纯化;利用SDS-PAGE、Lowry法对蛋白的相对分子质量、浓度等进行分析,对蛋白的酶切活性进行鉴定。结果:金黄色葡萄球菌基因组DNA经PCR扩增得到与预计大小相符的DNA片段,通过同源重组构建了表达载体pHTS-SplB-His;选取诱导前菌液D_(600nm)为2.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导4 h的最优条件发酵枯草芽孢杆菌,表达大量金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B;蛋白浓缩后,经镍柱分离纯化得到纯度较高且具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。结论:采用枯草芽孢杆菌进行发酵表达,可提高金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达量,并且能够得到具有剪切功能的蛋白。本研究可为外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的发酵技术提供重要参考。
- 丁晨张辉肖红剑李智华毕研伟李育中闫玲梅龙琼姚月婷寸韡
- 关键词：金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌分泌表达
- 树鼩白细胞介素6的原核表达、纯化及免疫原性鉴定
- 2017年
- 目的:克隆树鼩白细胞介素6(IL-6)基因,在大肠杆菌中高效表达、纯化,并鉴定免疫原性。方法:根据GenBank预测的树鼩IL-6基因序列设计引物并扩增基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建的重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达;表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IL-6的分布情况。结果:酶切及测序证实重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29×10~3,纯化后复性的重组蛋白纯度可达95%以上,免疫兔子后Western印迹和ELISA鉴定其具有免疫原性,在气管、心、脾、肾中能检测到IL-6。结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IL-6,纯化复性后具有良好的免疫原性。
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- 关键词：树鼩白细胞介素-6原核表达纯化免疫原性
- 一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法
- 本发明提供了一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法，如下：一、构建定点切割单链、双链核酸酶系统及同源序列；二、导入定点切割单链核酸酶系统和同源序列的细胞感染DNA病毒，待细胞病变，收集P1子代病毒；三、导入定点切...
- 寸韡李琦涵毕研伟李智华丁晨
- 文献传递
- 重组人甲状旁腺激素(1-84)对去卵巢大鼠骨质疏松模型的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察重组人甲状旁腺激素(1-84)对卵巢摘除骨质疏松大鼠的治疗作用。方法 36只4月龄的SD健康雌性大鼠,26只行双侧卵巢摘除术,10只作为假手术组,6 w后各处死6只检测造模效果。余20只骨质疏松模型鼠随机分为PTH组和安慰剂组。PTH组肌肉注射rhPTH(1-84)40μg/kg,每周3次。安慰剂组肌肉注射等量生理盐水,每周3次。治疗8 w后,测定并比较子宫湿重、股骨骨密度(BMD)、血清碱性磷酸酶(ALP)及吡啶酚(PYD)/Cr水平。结果双侧卵巢摘除6 w后,大鼠股骨BMD明显低于假手术组。8 w治疗后,PTH治疗组大鼠股骨BMD明显高于安慰剂组,血ALP及PYD/Cr也高于安慰剂组。结论 rhPTH(1-84)可显著增加BMD,对卵巢摘除诱导的大鼠骨质疏松有效。
- 丁晨唐维坤孙茂盛何昆云严敏杨蕾尹力李鸿钧
- 关键词：重组人甲状旁腺激素去卵巢大鼠骨质疏松
- 树鼩γ干扰素在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的:克隆树鼩γ干扰素(IFNγ)基因,在大肠杆菌中高效表达纯化并鉴定其免疫原性。方法:提取树鼩肺组织总RNA,经RT-PCR扩增出树鼩IFNγ基因,再克隆到原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达树鼩IFNγ;经金属螯合柱复性及纯化,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IFNγ的分布情况。结果:构建了重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,重组蛋白在30℃、1 mmol/L IPTG诱导4 h获得较高表达量,镍柱复性纯化后得到较高纯度的树鼩IFNγ。Western印迹显示IFNγ可与兔抗人IFNγ单克隆抗体特异性结合,应用Western印迹和ELISA分别检测树鼩IFNγ的免疫原性和抗体滴度,在树鼩的鼻、心、肝、肺、肾、气管中检测到IFNγ。结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IFNγ,复性纯化后具有良好的免疫原性。
- 丁晨肖红剑龙琼李智华毕研伟闫玲梅李育中姚月婷寸韡
- 关键词：树鼩Γ干扰素原核表达免疫原性
