张永华
- 作品数：12 被引量：27H指数：4
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省基础与前沿技术研究计划项目河南省教育厅自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 怀地黄新基因RgVP的克隆与序列特征分析
- 液泡质子泵焦磷酸水解酶(V-PPase)是植物生长和耐非生物胁迫过程中的关键酶。本研究基于5种已知植物ARGOS基因碱基序列的保守区,设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术获得一个495bp怀地黄cDNA序列。经过...
- 周延清张永华陈艳梅张喻李静云陈娟娟
- 关键词：怀地黄RACE
- 文献传递
- 植物B12D基因克隆研究进展被引量：1
- 2016年
- 综述了植物B12D基因的克隆、特性、时空表达、亚细胞定位、异源表达、过表达、生物和非生物胁迫应答、响应脱落酸与赤霉素等激素调节等方面的研究进展,展望了采用分子生物学新技术研究其调节植物胁迫应答反应机制和改良作物品质的发展趋势,为利用其进行植物耐胁迫和品质改良提供参考。
- 周延清王向楠张永华张喻王慧娜段红英
- 关键词：植物生物胁迫非生物胁迫基因功能
- 怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶基因的克隆、序列特征和时空表达分析被引量：16
- 2013年
- 目的对怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶(Rehmannia glutinosa f.hueichingensis 3-ketoacyl CoA-thiolase,RghKAT)cDNA全长基因进行克隆及分析,为怀地黄分子育种提供候选基因和理论依据。方法根据其他植物ARGOS基因序列的保守结构域设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,获得RghKAT cDNA全长序列;通过生物信息学技术对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对;利用实时荧光定量PCR技术检测了其在2个时期、10个组织的表达。结果 RghKAT基因全长1 713 bp,包含了1 395 bp的开放阅读框(ORF),编码464个氨基酸;同源比对和系统进化分析表明,RghKAT的核苷酸序列与葡萄、番茄、毛果杨、拟南芥和小麦的KAT核苷酸序列同源性分别达84%、82%、82%、79%、73%;RghKAT编码的氨基酸序列与矮牵牛、葡萄、黄瓜、拟南芥和小麦的KAT氨基酸同源性分别为88%、88%、86%、87%、78%;各物种KAT酶进化树符合物种进化规律;理化性质表明该蛋白为略成碱性的稳定蛋白质,蛋白质二级结构主要由α-螺旋、不规则卷曲、β-折叠和β-转角构成;在N端存在一个由70个氨基酸残基组成的信号肽;RghKAT蛋白三维结构具有硫解酶典型的特征序列;表达谱分析表明,RghKATmRNA在各时期、各组织中均有表达,盛花期花瓣中表达最强,而在幼苗期叶中表达量最低。结论成功克隆了RghKAT cDNA全长序列,具有KAT基因的结构特性及其产物硫解酶典型的特征序列,其在盛花期花瓣中表达量最高。
- 周延清张永华张喻陈艳梅白妍妍魏海方段红英周春娥
- 关键词：怀地黄生物信息学分析蛋白质二级结构
- 怀地黄基因片段及其中转座酶基因的克隆与序列分析被引量：6
- 2012年
- 根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开放阅读框,大小为450bp,编码由150个氨基酸组成的转座酶。然后,基于该开放阅读框的碱基序列,设计另一对引物,用PCR方法,从中扩增出该完整开放阅读框的序列片段。
- 周延清姚换灵段红英周春娥张永华陈艳梅张喻
- 关键词：怀地黄基因克隆开放阅读框
- 地黄基因RgVP、RghKAT、RglKAT与RghBNG的克隆和表达
- 在植物中已经发现一些与植物器官膨大和生物量增加有关的功能基因，即增产基因，如生长素调节的器官大小基因（Auxin-regulated gene involved in organ size，ARGOS）和拟南芥液泡质子泵...
- 张永华
- 关键词：地黄生物信息学RT-QPCR原核表达
- 文献传递
- 植物基因启动子的克隆研究
- 植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件。启动子对外源基因的表达水平影响很大,是基因工程表达载体的重要元件。植物基因启动子按作用方式大体可以分为3类,即组成型启动子、诱导型启动子和组...
- 周延清张喻张永华陈艳梅
- 关键词：启动子克隆方法功能分析
- 文献传递
- DNA分子标记技术在四大怀药研究中的应用概况被引量：3
- 2012年
- DNA分子标记技术是比形态标记、细胞标记和生化标记理想的遗传标记技术,已经广泛应用于动植物和微生物的诸多研究中。但是它在四大怀药中的应用相对较少。因此,对几种DNA分子标记技术在四大怀药的遗传多样性、指纹图谱、居群遗传结构、品种鉴定和真伪品鉴别等方面的研究成果和新进展进行了综述,以期为四大怀药的深入研究提供参考。
- 周延清周鹏郭静佩张永华陈艳梅张喻杨德勇许春
- 关键词：DNA分子标记指纹图谱
- 大豆脂肪酸脱饱和酶反义基因转化根癌农杆菌研究被引量：1
- 2011年
- 根据NCBI中大豆fad2-1序列设计引物,用PCR方法从大豆的基因组DNA中扩增大豆脂肪酸脱饱和酶基因,克隆到pMD18-Tvector中,转化大肠杆菌JM109菌株,进行测序与比对。然后,将其反向克隆到表达载体pBt,转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因的农杆菌工程菌。结果表明,克隆的fad2-1基因为1 196 bp,基因序列与NCBI中已发表的fad2-1序列只有4%的差异,相似性大于95%,说明克隆的基因是大豆fad2-1基因;构建了该基因的反向表达载体,转入农杆菌内。这为利用农杆菌介导法把该反义基因转入大豆,改良脂肪酸成分奠定了基础。
- 周延清田苗苗王芳陈艳梅张永华苑保军
- 关键词：大豆反义技术根癌农杆菌
- 地黄基因克隆、表达与调控研究
- 地黄是中国、韩国和日本等国重要的药用植物，其块根药用。怀地黄是我省道地药材之一，也是四大怀药之一，具有重要的药用、保健、经济、食用和观赏的价值。本文采用PCR、兼并RT-PCR和RACE、hi-TAIL-PCR和转录组测...
- 张永华张喻段红英王婉坤王向楠王慧娜
- 关键词：地黄基因克隆非生物胁迫转录组测序毛蕊花糖苷
- 怀地黄液泡质子泵焦磷酸水解酶基因的克隆与生物信息学分析被引量：6
- 2013年
- 为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL 2.1和DNAMAN 4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长度为495bp。经过NCBI数据库BLAST分析,发现它与莲花、蓖麻、烟草、苜蓿、葡萄、碧桃、灰绿藜7种植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性很高,在83%～86%,因此获得的基因是地黄液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因。
- 周延清张永华陈艳梅张喻李静云陈娟娟白妍妍魏海方
- 关键词：怀地黄生物信息学分析
