张敏
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：延安大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金陕西省教育厅省级重点实验室科研与建设计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖被引量：4
- 2016年
- 目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。
- 张向前张敏张静王艳梅虎小毅孙宏飞童东东熊晓蕃赵正豪
- 关键词：真核表达载体胃癌MKN-45细胞细胞增殖
