徐源
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达被引量：3
- 2017年
- 目的探讨CD137-CD137L信号是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6/c-Jun氨基末端激酶/活化蛋白1(TRAF6/JNK/AP-1)途径调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。方法采用组织块原代培养小鼠VSMC,第3~5代细胞用于实验。VSMC分为6组:对照组、CD137刺激组、CD137抑制组、siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组。Western blot检测各组TRAF6、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)、NFATc1蛋白表达水平。免疫荧光法检测各组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达。结果 (1)与对照组相比,CD137刺激组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。(2)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137刺激组相比,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无明显改变,而p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05)。(3)免疫荧光检测显示:CD137刺激组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P<0.05);CD137抑制组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P<0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致。结论 CD137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响NFATc1的表达。
- 徐源王中群仲威邵晨李波刘俊李晓阳严金川
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6C-JUN氨基末端激酶活化蛋白1
- 小鼠主动脉环血管新生实验模型的优化
- 2016年
- 目的：建立优化体外培养小鼠主动脉环血管新生实验模型的条件和方法。方法：分离C57BL/6小鼠的胸主动脉,剔除主动脉周围的脂肪及结缔组织,使用Ⅱ型胶原酶消化动脉,剥离血管外膜,将血管剪成0.5 mm长的动脉环,置于预先包被有鼠尾Ⅰ型胶原的96孔板中培养,给予DMEM＋2.5%胎牛血清,DMEM＋10%胎牛血清或DMEM＋2.5%胎牛血清＋血管内皮生长因子（VEGF,终浓度为50 ng/m L）100μL/孔,覆盖胶原表面。倒置显微镜下观察动脉环新生微血管。免疫荧光染色鉴定内皮细胞。结果：鼠尾Ⅰ型胶原包被的96孔板（DMEM＋2.5%胎牛血清）内新生微血管数量明显多于24孔板（t=-6.000,P〈0.05）。DMEM＋10%胎牛血清组新生微血管数量明显高于DMEM＋2.5%胎牛血清组和DMEM＋2.5%胎牛血清＋VEGF组。DMEM＋10%胎牛血清组培养24 d后小鼠主动脉环开始出芽,68 d后动脉环新生微血管分支、数量及长度达到高峰。结论：优化后的方法可以得到生长状态良好,出芽率高,纯度高的离体小鼠动脉环血管新生实验模型。
- 翁嘉懿严金川陈瑶李波李晓阳徐源刘俊
- 关键词：主动脉环血管新生
- CD137分子通过活化T细胞核因子c1调控血管平滑肌细胞表型转变
- 2017年
- 目的 探讨CD137分子信号是否通过活化T细胞核因子c1（NFATc1）调控血管平滑肌细胞（VSMC）表型转变.方法 将小鼠VSMC采用组织块贴块法原代培养,细胞分为对照组、CD137刺激组和CD137抑制组,以CD137L重组蛋白及抗CD137阻断型抗体分别激动和抑制CD137信号.在小干扰RNA试验中,将小鼠VSMC分为对照序列组与si-NFATc1组并分别转染对照序列与si-NFATc1序列.采用荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westem blot检测VSMC中NFATc1和表型蛋白、肌动蛋白α（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）、波形蛋白的表达;免疫荧光和Western blot检测核蛋白中NFATc1活化水平.采用Transwell迁移实验检测穿膜细胞数目,比较细胞迁移能力.结果 与对照组比较,CD137刺激组中VSMC中NFATc1（5.07 ±0.36比1.00±0.00）及波形蛋白（3.23±0.27比1.00±0.00）表达较高（P均＜0.05）,而α-SMA（0.73±0.15比1.00±0.00）、SM-MHC（0.45±0.05比1.00±0.00）表达较低（P均＜0.05）.与CD137刺激组比较,CD137抑制组NFATc1（1.56±0.27比5.07±0.36）和波形蛋白（1.21±0.17比3.23±0.27）表达较低（P均＜0.05）,而α-SMA（2.01±0.43比0.73 ±0.15）和SM-MHC（2.85±0.32比0.45±0.05）表达较高（P均＜0.05）.与对照序列组比较,siNFATc1组VSMC的SM-MHC、α-SMA的mRNA及蛋白水平较高,而波形蛋白表达较低（P均＜0.05）.细胞迁移实验显示,CD137L刺激组细胞迁移数量高于对照组（3.85±0.31比1.00±0.00,P＜0.05）,而抑制NFATc1后迁移细胞数与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 CD137信号通过NFATc1参与VSMC表型调控.
- 仲威李波刘俊徐源陈蕊邵晨王中群严金川
- 关键词：动脉粥样硬化
