李路路
- 作品数:17 被引量:18H指数:3
- 供职机构:中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金:国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金中国科学院战略性先导科技专项更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 免疫缺陷小鼠体内人源T淋巴细胞亚群流式检测方法研究
- 2022年
- 目的比较流式细胞术(FCM)与活体成像法、qPCR法识别外周血CAR^(+)细胞的结果,验证其结果的可靠性和灵敏性。方法分别给予免疫缺陷型荷瘤(Raji-Luc细胞造模)小鼠溶媒、CAR-T1或CAR-T2细胞。在不同时间点测定动物体内Raji-Luc细胞的荧光强度,FCM法测定人源T淋巴细胞和CAR-T细胞中的CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)个数,并使用qPCR法检测外周血中每纳克基因组DNA中CAR-T1和CAR-T2拷贝数。结果CAR-T1组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第5~7周大幅增加。CAR-T2组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第10~14天大幅增加,之后大幅降低,给予细胞后第4周降至基线且未见再次扩增。CAR-T细胞的流式检测结果与活体成像结果基本相符,且与qPCR法检测外周血中CAR-T细胞的分布趋势基本一致。此外,EDTA-K2抗凝剂对FITC标记的抗CD8^(+)抗体有较明显的影响,导致标记为CD3^(+)CD8^(+)的细胞群左移且检测结果为零。结论对不同增殖特性的CAR-T细胞,流式检测结果与其体内肿瘤杀伤情况相关,且比qPCR法更为准确和灵敏,为CAR-T细胞的非临床安全性评价试验设计提供有益借鉴。
- 姜华黄瑛李路路王晓姝兰洁侯田田耿兴超刘丽文海若
- 关键词:生物分布抗凝剂
- 食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1的毒性研究
- 2024年
- 目的:考察食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后的体内毒性,探索安全剂量范围,为后续临床试验提供参考信息。方法:30只食蟹猴随机分成3组,包括溶媒对照组和低、高剂量(1.0×10^(8)、4.0×10^(8)pfu)组,每组10只,雌雄各半。采用肌肉注射给药,每周给药2次,连续给药6周,恢复期8周。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每次给药后1~2天观察注射部位症状,每周称量体重。分别在检疫期、首次给药后、给药期结束、恢复期结束的不同时间点进行安全药理(体温、血压、心电图)测定、临床病理(血液学、血凝、血清生化、尿生化)检查、免疫学(T淋巴细胞、细胞因子、免疫原性)测定、组织病理学检查和脏器称重。结果:给药后,动物未见异常症状、注射部位刺激性、体重和摄食量改变,未见安全药理和临床病理指标有意义的变化。与溶媒对照组比较,第41天,低剂量会引起动物CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例升高,高剂量未见明显变化。第13至97天,低、高剂量均能引起动物产生抗载体结合抗体、抗抗体,以及个别动物检出hPD-1表达产物。证明药物在体内产生免疫活性和介导免疫原性。组织病理学检查显示,给药期结束时,低、高剂量组动物注射部位极轻度至中度混合细胞浸润,高剂量组动物坐骨神经极轻度髓鞘/轴突变性;恢复期结束时注射部位病变减为极轻度,坐骨神经病变未见恢复趋势。低、高剂量组动物未见组织脏器重量改变。结论:食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后,动物体内耐受良好,受试物未见毒性反应剂量(NOAEL)是1.0×10^(8)pfu。上述研究结果为药物开展临床试验提供了数据支持。
- 王欣田超赵锐孙立潘东升屈哲苗玉发李路路王田田李劲风耿兴超
- 关键词:食蟹猴生物分布
- 嵌合抗原受体T细胞治疗产品药效学及毒性研究
- 目的:研究嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor,CAR-T细胞)对肿瘤模型动物肿瘤细胞的杀伤作用,对肿瘤动物生存期及生存率的影响,以及CAR-T细胞是否对肿瘤模型动物产生毒性作用。
- 黄瑛侯田田霍艳肖亚妮姜华李路路王超张河战李波王军志
- 关键词:生存期毒性
- 不同荧光标记检测抗体组合及不同抗凝剂对流式测定食蟹猴T淋巴细胞亚群的影响被引量:4
- 2021年
- 目的比较不同荧光标记检测抗体组合与不同抗凝剂对检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的影响,为相关检测提供方法参考。方法取肝素钠抗凝猴血50μl分别与两组荧光检测抗体PerCP-CD3/FITC-CD8/PE-CD4(检测抗体组合1)和PerCP-CD3/FITC-CD4/PE-CD8(检测抗体组合2)孵育,流式细胞仪测定CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和平均荧光强度(MFI),并计算CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值,比较不同荧光标记抗体组合检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的结果。取肝素钠和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝猴血各50μl分别与上述两组荧光检测抗体组合进行孵育,测定CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和MFI,计算这两种淋巴细胞亚群比值,比较不同抗凝剂对食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群检测结果的影响。结果⑴肝素钠抗凝猴血荧光检测抗体测定T淋巴细胞亚群的结果显示,FITC标记抗CD4抗体检测到的CD4^(+)T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗CD4抗体检测到的CD4^(+)T淋巴细胞百分比和MFI,同样,FITC标记抗体检测到的CD8^(+)T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗体检测到的相应结果,应用检测抗体组合2的CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值显著低于应用检测抗体组合1的,雌、雄动物均出现前述结果,雌性动物的变化更为显著。⑵应用抗体组合1检测时,与肝素钠抗凝组相比,EDTA-K2抗凝剂组CD3^(+)CD4^(+)淋巴细胞百分比显著增加、CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和CD8^(+)MFI显著降低,CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值显著增加;应用抗体组合2检测时,仅发现EDTA-K2抗凝组比肝素钠组CD8^(+)MFI显著降低,未见其他有意义的变化。结论FITC标记抗CD4抗体和抗CD8抗体检测相应细胞百分比和荧光强度均小于PE标记的抗体,在应用这两种荧光标记抗体进行T淋巴细胞亚群检测时应注意对试验结果的影响和合理�
- 姜华刘丽李路路苗玉发文海若孙立王欣张颖丽李伟霍艳耿兴超
- 关键词:外周血T淋巴细胞亚群食蟹猴抗凝剂
- CAR-T治疗诱导细胞因子释放综合征的机制及临床前安全性评价被引量:3
- 2023年
- 嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法极大地改变了癌症的治疗前景,细胞因子释放综合征(CRS)是病理性免疫系统激活的严重全身炎症反应,也是CAR-T治疗过程中最常见且致命的毒性反应。目前CRS机制尚未完全阐明,临床前研究的实验模型主要包括异种移植免疫缺陷小鼠模型、同源小鼠模型、转基因小鼠模型、人源化小鼠模型和非人灵长类动物模型。由于种属差异且缺乏体外细胞模型,临床前预测CAR-T细胞引起CRS的风险仍是亟待解决的问题。从CRS的相关指导原则及法规、机制及临床前安全性评价方法和模型3个方面对CAR-T诱发的CRS进行综述,以期为CAR-T细胞治疗产品的临床前安全性评价策略提供新的思路。
- 傅盈双李双星李路路屈哲霍桂桃杨艳伟张頔耿兴超李波林志
- 关键词:临床前研究安全性评价
- 生物技术药物免疫原性评价的技术发展概述被引量:6
- 2017年
- 药物的免疫原性是指药物刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的性质。评价非期望的免疫原性是生物技术药物临床前和临床评价的重要内容。免疫原性评价内容包括方法的开发、验证、药物诱导的抗体反应水平检测(滴度)、抗体的特性研究、抗体的中和活性测定、分析抗体产生对疗效、毒性和药动学的影响,并预测对人体潜在的免疫原性强弱。如何提高动物模型的预测性、优化检测技术、实现评价方法的规范化和标准化,是未来免疫原性评价亟需解决的问题。
- 黄瑛姜华李路路李伟王欣霍艳
- 关键词:生物技术药物评价免疫原性安全性评价免疫原性评价
- 抗HER2靶点抗体偶联药物大鼠重复给药毒性研究
- 2019年
- 目的:通过对大鼠尾静脉重复注射给药重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1,对其进行临床前安全性评价。方法:大鼠随机分成5个试验组,包括空白对照组、受试物低(5 mg·kg-1)、中(11 mg·kg-1)、高(22 mg·kg-1)剂量组和已知对照药品组(22 mg·kg-1,Kadcyla?),每组30只动物,雌性各半。尾静脉注射给药,每周给药1次,连续给药3次,末次给药后恢复3周。研究期间,在不同时间点对动物临床症状、体重、摄食量、体温、尿液、血液学、血清生化及组织病理学等指标进行检测。结果:给药后,动物出现一定程度的不良反应,且作用强度呈剂量依赖性递增。毒副反应症状包括摄食量减少、尿液pH值改变;血液学检查发现,动物Lymph、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、APTT下降,WBC、Neut、Mono、Eos、Baso、Retic计数升高;血清生化检查发现,动物TG、A/G、Na+、K+下降,ALT、AST、ALP、GGT、CHO、LDH、BUN、TP升高;骨髓检查发现,受试物影响动物红系细胞成熟分化;受试物引起动物肝脏、脾脏、肺(含支气管)重量增加,睾丸、附睾重量减少;组织病理学检查发现,肝脏、肾脏、脾脏、垂体、肾上腺、舌、皮肤细胞有丝分裂项增加,睾丸生精细胞数目减少和变性坏死,附睾精子减少和纤维组织增生。对照品组动物,给药后出现上述同样的改变。试验结果表明,受试物和已知对照药品两种药物的大鼠毒性研究结果具有相似性。结论:大鼠尾静脉重复注射给予重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1后,毒性靶器官为肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、肺(含支气管)、肠系膜淋巴结、十二指肠、睾丸、附睾、眼球、垂体、肾上腺、皮肤、舌、胸骨(骨髓)。未见毒性反应剂量(NOAEL≤5 mg·kg-1)。上述研究结果支持该药物成功获得临床试验批准,为后续开展临床研究提供了参考依据。
- 王欣黄瑛海岗林志苗玉发王超姜华李路路王海彬霍艳
- 关键词:ADC
- 酮康唑致人L02肝细胞毒性差异蛋白鉴定
- 2019年
- 目的观察酮康唑(ketoconazole,KTZ)对人L02肝细胞的毒性效应,鉴定细胞毒性差异蛋白。方法KTZ浓度为30、50、80和100mg/L,与人L02肝细胞共培养2、4、6和8h,采用CCK-8法和流式细胞术检测KTZ对细胞增殖和胞内活性氧的影响;提取产生明显毒性的实验组细胞和对照组细胞的胞内蛋白质,进行双向电泳,并用质谱鉴定差异性蛋白。结果细胞增殖抑制率呈剂量依赖性显著性升高,胞内活性氧呈剂量依赖性显著性升高。共鉴定出7种有功能的细胞内差异性蛋白。结论鉴定出的差异性蛋白为KTZ毒性机制研究提供新的参考。
- 苗玉发康慧君王晓姝李路路张河战
- 关键词:酮康唑肝细胞毒性蛋白质组学
- 用蛋白组学技术鉴定肝细胞损伤大鼠血清中的差异蛋白被引量:1
- 2019年
- 目的鉴定酮康唑(ketoconazole,KTZ)和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)致大鼠肝细胞损伤后血清中的差异蛋白。方法选取7周龄Wistar雄性大鼠96只,随机分为KTZ组32只,对照组32只和CCl 4组32只。KTZ组灌胃给予225 mg/kg的KTZ,每天1次,共2次。对照组灌胃给予等量生理盐水1次。CCl 4组灌胃给予10 mL/kg的CCl 4(V/V:30%)1次。给药结束后4、24、48和72 h,麻醉动物取血,制备血清,肝用于制备病理切片。发生明显肝细胞损伤的KTZ组和CCl 4组血清,以及对照组血清用于蛋白提取,然后采用双向凝胶电泳(two-dimensional gel-electrophoresis,2-DE)联合质谱技术鉴定差异蛋白。结果给药结束后24 h,KTZ组和CCl 4组动物的谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)升高,差异具有统计学意义(P<0.05),并伴有肝细胞病理学改变。与对照组相比,KTZ组和CCl 4组共鉴定出载脂蛋白AI,血浆谷胱甘肽过氧化物酶,载脂蛋白E和维生素D结合蛋白等4种血清差异蛋白。结论鉴定出的4种差异蛋白可以作为肝细胞损伤的潜在生物标志物进一步研究。
- 苗玉发康慧君王晓姝李路路曲哲杨艳伟张河战李波
- 关键词:酮康唑四氯化碳
- 44家食品药品检测机构实验室检测6项血液学指标能力验证评价
- 目的评价食品药品检测机构对白细胞(WBC);红细胞(RBC);平均红细胞体积(MCV);红细胞比容(HCT);血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)等6种血液学指标的检测能力。方法分别采用单因素方差分析和t检验法对能力验证...
- 苗玉发李路路王晓姝潘东升张河战
- 关键词:血液学