王磊
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 不同日龄仔猪小肠肌间神经元类型的研究
- 2008年
- 为探讨仔猪小肠肌间神经元类型与仔猪发育的关系,本研究采用组织化学和免疫组织化学方法对0、5、28日龄仔猪小肠肌间神经元进行了定性研究和定量测定。结果表明：神经元大小和形态与神经元的发育直接相关,0日龄时,神经元多为幼稚型,5-28日龄时神经元逐渐趋于成熟;0日龄小肠各段的肌间神经元数量分别为：十二指肠272.11±49.21、空肠173.89±30.95、回肠177.22±40.58,均显著高于5和28日龄相应肠段;28日龄仔猪十二指肠肌间神经丛NADPH阳性神经元占神经元总群的百分比（NADPH百分比）显著高于0日龄,其余肠段NADPH百分比随日龄增加无明显变化;肌间神经丛NF阳性神经元占神经元总群的百分比（NF百分比）也呈现出相同的变化趋势。本研究揭示：仔猪出生后肌间神经丛在形态和不同亚群神经元比例上均有一调整期。
- 张晗赵琪王瑞玲王磊巢国正滕可导
- 关键词：神经微丝S-100肌间神经丛小肠仔猪
- 鸡胚心脏PCNA及AgNOR分布的研究被引量：1
- 2008年
- 为探讨鸡胚心脏发育过程中细胞增殖的变化情况，采用免疫组织化学SP法和AgNOR银染法分别检测了第7～18天鸡胚心脏PCNA和AgNOR的分布。结果显示：1）PCNA免疫反应阳性心肌细胞主要分布于心包侧，随胚龄增加阳性率下降，至第13天后呈小幅回升，第7～18天平均阳性率为29．20％；PCNA免疫反应阳性内皮细胞在胚胎早期分布于心内膜内皮，胚胎中后期主要为心肌血管内皮呈阳性，第7～13天，内皮处于低增殖阶段，第14天后逐渐增加，第7～18天平均阳性率为15．33％。2）AgNOR阳性心肌细胞第7天为聚集型，第8～14天为混合型，第15～18天为单一型，随胚龄增加阳性率下降，至第15天后呈小幅回升，第7～18天平均阳性率为58．84％；AgNOR阳性内皮细胞类型不易区分。第7～9天平均阳性率为9．25％，此后阳性率逐渐上升，至第18天时达到最高为27．07％，第7～18天平均阳性率为13．95％。结果表明，第7～18天鸡胚心脏发育过程中以心肌细胞增殖为主，内皮细胞增殖较慢且较心肌细胞滞后。第15天后心肌细胞和内皮细胞增值率均升高，可能与心肌-内皮通过某些信号途径相互作用有关。
- 王磊张晗张涛王伟张爽王安如滕可导
- 关键词：增殖细胞核抗原鸡胚心脏细胞增殖
- 三黄鸡CD4胞外区基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备
- 2007年
- 本研究根据鸡CD4分子胞外区基因序列设计合成一对引物,用PCR技术从三黄鸡的cDNA文库中克隆出了其CD4胞外区基因片段,大小为1 206 bp,将该片段插入pMAL-p2X表达载体中,转化大肠杆菌TB1感受态细胞后进行诱导表达,获得了分子量约为87.5 kD的融合蛋白。表达产物经Amylose树脂亲和层析柱纯化,得到了高纯度的鸡CD4胞外区的融合蛋白。利用此蛋白免疫小鼠,制备了高效价的鼠源抗鸡CD4胞外区的抗体,结果表明该蛋白具有良好的抗原性。
- 王成玉唐秀山王磊廖定为张冰
- 关键词：胞外区克隆原核表达
- 克隆猪主要组织相容性复合体Ⅱ类DR基因座α链和β链及其体外复合体的构建被引量：6
- 2006年
- 为推动猪主要组织相容性复合体(MHC)空间构象的研究,体外构建了猪的MHC-Ⅱ类蛋白复合体(SLA-Ⅱ)。首先克隆长白-达兰杂交商品猪DRA和DRB基因,用富含甘氨酸-丝氨酸的Linker(G4S)3连接DRA和DRB的胞外区,用SOE-PCR得到复合体基因DRA-linker-DRB,插入原核表达载体进行表达;对表达的融合蛋白进行Western-blot鉴定、纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化。对分离的目的蛋白、融合蛋白及麦芽糖结合蛋白(MBP)进行二级结构测定。得到83.4 ku的可溶性融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DRB,其Western杂交带与表达条带大小一致。切割分离后的目的蛋白大小为40.9 ku。目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB二级图谱显示该蛋白呈典型α-螺旋结构,各二级结构元件α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲的氨基酸数目分别为80、121、101和80,融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DR与目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB的二级结构各元件的符合率分别达到了95%、96.7%、91.1%和93.0%。结果分析表明得到的复合体构象正确,可用于进一步的B细胞抗原表位的筛选等结构和功能研究。
- 高凤山王磊李新生李云岗王慧飞方勤美郝慧芳夏春
- 关键词：主要组织相容性复合体基因座
- 三黄鸡CD8α/βcDNA克隆与表达及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2007年
- 为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coliJM109中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长447 bp,编码149个氨基酸,蛋白质的分子质量为18.5 ku,表达量占菌体蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1∶64 000。本实验所得鸡CD8α/β的多克隆抗体将用于四聚体研究。
- 唐秀山王磊廖定为蒋一男夏春
- 关键词：CD8Α原核表达多克隆抗体
- 两种显示大鼠不同组织微血管方法的比较被引量：1
- 2009年
- 目的比较CD34免疫组织化学法和硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(NBT/BCIP)酶组织化学法显示不同组织微血管的特性。方法选取大鼠小肠、肾、脾、肝、心、肺和皮肤等7种组织,通过形态学分析和显微计数,分析上述两种方法的区别。结果CD34免疫组织化学法对所取各器官组织内微血管均能显示,NBT/BCIP酶组织化学法能显示心、肠、肾、肝组织内微血管,而不能显示皮肤、脾和肺组织内微血管;对同一组织同一切面,CD34免疫组织化学法显示微血管密度显著性低于NBT/BCIP酶组织化学法。结论CD34免疫组织化学法适于各种组织内微血管的显示,而NBT/BCIP酶组织化学法能够更大密度地显示部分器官组织内的微血管。
- 张爽张涛王磊王安如俞英昉滕可导
- 关键词：微血管CD34酶组织化学
- 哺乳仔猪外周血5-羟色胺的合成与代谢研究
- 2010年
- [目的]探讨哺乳仔猪外周血5-羟色胺的合成与代谢随日龄变化的规律。[方法]选用15只0、5和15日龄的英系大白猪为试验动物,采用反相高效液相色谱——紫外检测法对其外周血血清中L-Trp、5-HT和5-HIAA的含量进行测定。[结果]仔猪初生时L-Trp的含量为(16.92±1.74)μmol/L,5日龄时为(59.94±10.88)μmol/L,15日龄时为(70.42±6.48)μmol/L;仔猪初生时5-HT的含量为(12.85±1.79)μmol/L,5日龄时为(4.81±2.05)μmol/L,15日龄时为(5.49±1.09)μmol/L;代谢产物5-HIAA在各日龄仔猪血清中均未检出。[结论]随日龄增加,哺乳仔猪外周血L-Trp的含量显著增加(P<0.05),而5-HT的含量与L-Trp-5-HT通路转化率在初生时最高(P<0.05),此后趋于稳定(P>0.05)。
- 张晗张涛王磊张爽王安如滕可导
- 关键词：5-羟色胺L-色氨酸5-羟吲哚乙酸外周血哺乳仔猪
- 不同日龄猪小肠黏膜5-HT分布特征的研究被引量：6
- 2008年
- 【目的】研究猪小肠黏膜中5-HT分布与小肠发育之间的关系,为阐明5-HT在发育过程中对小肠调节作用机理提供形态学依据。【方法】选用0、5、15和100日龄英系大白猪,采用免疫组织化学染色结合显微镜观察计数对猪小肠各段5-HT的分布进行定性和定量研究。【结果】5-HT免疫反应阳性细胞广泛分布于0、5、15和100日龄猪小肠各段的绒毛中段和底端以及肠腺上皮细胞之间。由0日龄至100日龄,小肠5-HT免疫反应阳性细胞密度呈先增加后递减的趋势,小肠各段5-HT免疫反应阳性细胞密度呈现由十二指肠至回肠显著递减的趋势;各日龄各肠段肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量均显著高于绒毛。【结论】猪小肠黏膜5-HT主要分布于肠腺上皮细胞间,5-HT免疫反应阳性细胞密度随日龄改变而发生变化,且各肠段分布规律不尽相同。
- 张晗王磊张涛王凤华王安如张爽滕可导
- 关键词：5-HT小肠黏膜免疫组织化学发育
- 鸡胚肝脏发育过程中增殖细胞核抗原及核仁组织区的免疫组化观察被引量：3
- 2008年
- 王凤华戚飞王磊滕可导
- 关键词：增殖细胞核抗原发育过程核仁组织区免疫组化鸡胚免疫组织化学方法
- 不同海拔孵化对鸡胚肝细胞增殖的影响
- 2007年
- 戚飞魏泽辉张晗吴常信滕可导王磊
- 关键词：孵化率降低细胞增殖鸡胚海拔高原环境高产品种
