张际青
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 发文基金：江西省自然科学基金江西省卫生厅基金江西省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、
- 石小玉李文林梁朝张际青赵林李红
- 关键词：基因转染U937细胞
- 293包装细胞产生重组逆转录病毒的基因转染研究
- 2003年
- 目的 :如何提高重组逆转录病毒的滴度和基因转染率 ,是目前需要研究的问题。方法 :目的基因连接到病毒载体形成重组子 ;病毒载体质粒转入包装细胞 2 93 ,产生无复制能力的病毒颗粒 ;用病毒感染NIH3T3细胞 ,测定病毒的滴度 ;将携带有目的基因的病毒颗粒转染靶细胞 ,绿色荧光蛋白 (GFP)为转染阳性细胞的标记物 ,FACS分离阳性细胞 ;Westernblot检测目的基因表达。结果 :用包装细胞 2 93产生的病毒颗粒 ,其滴度高达 3× 10 9;用携带目的基因的病毒转染悬浮细胞UT7,转染率为 60 % ,转染贴壁细胞MDA -MB -4 3 5 ,转染率为 99% ,转染原代培养的造血干细胞 ,转染率为 3 1% ;UT7细胞和MDA -MB -4 3 5细胞分别表达目的基因的产物 ,5个月以后 ,仍能提出滴度的病毒 ,并能有效地转染靶细胞 ,转入的目的基因能持续和稳定地表达 。
- 石小玉李文林张际青
- 关键词：重组逆转录病毒基因转染病毒载体造血干细胞
- 黏附素5胞外区克隆、转染及抗人乳腺癌细胞生长的研究
- 2007年
- 目的:克隆和转染黏附素5胞外区,并研究其对人乳腺癌MDA-MB435细胞株生长的影响。方法:RT-PCR技术克隆黏附素5胞外区(称为CED1-4),将其插入pMSCV质粒载体,在大肠杆菌XL-blue扩增,提取和纯化pMSCV-CED1-4,酶切、电泳和测序检测CED1-4序列。CED1-4基因转染MDA-MB435细胞株,RT-PCR和Western blotting检测MDA-MB435细胞表达CED1-4。细胞增殖实验和乳腺癌裸小鼠致瘤实验检测CED1-4对MDA-MB435细胞体内外生长的影响。结果:构建了重组体pMSCV-CED1-4,电泳显示CED1-4条带在1636bp-1018bp区间,测序显示CED1-4基因长1452bp,编码484氨基酸。经PCR和Western blotting证实,CED1-4基因转染的MDA-MB435细胞在mRNA和蛋白质水平表达CED1-4。细胞增殖实验结果表明,实验组MDA-MB435细胞增殖低于实验对照组和空白对照组(P<0.05)。乳腺癌裸小鼠致瘤实验显示,实验组移植瘤平均体积和重量低于实验对照组和空白对照组(P<0.05)。结论:黏附素5胞外区CED1-4能在体内外抑制人乳腺癌MDA-MB435细胞株的生长。
- 石小玉李文林熊丽霞张际青熊建军李红
- 关键词：钙粘着糖蛋白类克隆基因转染
