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排序方式：

人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析被引量：2: 1998年; 为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．; 崔振中崔振中寿思明刘朋朋朱宝利; 关键词：基因文库促红细胞生成素 PCR EPO

定点突变的人胰岛素基因在CHO细胞表达的研究被引量：2: 1999年; 目的　研究在哺乳动物细胞中表达人胰岛素。方法　采用寡核苷酸介导的定点突变方法，改造人胰岛素基因组基因，将哺乳动物细胞内蛋白质前体加工酶Ｆｕｒｉｎ的识别和切割位点Ａｒｇ－Ｘ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－样序列，引入人胰岛素原Ｃ肽两端，在普通ＣＨＯ细胞表达了该改造后的基因。结果　首先应用突变引物Ⅰ：ＣＴＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＧＴＣ，引物Ⅱ：ＣＡＣＧＣＴＴＣＴＧＣＣＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣ，按照Ｋｕｎｋｅｌ的方法，成功地进行了人胰岛素基因上两个位点的同时突变改造。利用表达载体ＰＲＣ／ＣＭＶ和突变后的胰岛素基因，构建成表达载体ＣＭＶ／ＭＩＮＳ，并在ＣＨＯ细胞中获得了表达。结论　用ＲＩＡ法检测在暂态表达的ＣＨＯ细胞培养液中人胰岛素的表达量为５．５～７０．０μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－１。同时，还利用Ｇ４１８进行了胰岛素表达细胞株的筛选，筛选出的ＣＨＯ细胞株的表达量为：６．５～２５．５μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－１。; 寿思明朱宝利崔振中齐顺章; 关键词：人胰岛素定点突变基因表达 CHO细胞糖尿病

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寿思明