陈华涛
- 作品数：38 被引量：60H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 陕西省富平县奶山羊养殖现状调查被引量：4
- 2022年
- 为了解陕西省富平县奶山羊养殖现状,通过整理2018年1月至2020年5月富平县奶山羊养殖的相关资料,对富平县奶山羊养殖现状进行总结分析,结果发现富平县奶山羊产业在长期的发展进程中,形成了以现代乳品加工企业为引导,以优质奶山羊资源为基础,以规模化养殖为方向,以机械化挤奶为突破,以培育新型职业农民为抓手,以奶源质量安全为保障,建立健全良种繁育、动物防疫、饲草饲料、技术服务四大体系的奶山羊全产业链,奶山羊产业发展势头良好;富平县已经建立了一部分标准化的奶山羊养殖示范区和示范农场,为奶山羊养殖发展提供了成熟模板,促进了奶山羊养殖逐渐向规模化、标准化发展。然而,当前仍存在奶山羊乳房炎和呼吸道疾病多发的问题,防疫体系有待完善。
- 王小雨李丹赵光明张浩袁亚林靳亚平陈华涛
- 关键词：奶山羊饲喂方式防疫体系
- 丁香油微囊的制备与测定方法的建立被引量：5
- 2008年
- 以明胶和阿拉伯胶为囊材,丁香油为芯材,采用复合凝聚法制备丁香油微囊,探讨微囊制备过程中主要影响因素及适宜工艺条件并建立了测定方法。结果表明,丁香油微囊平均粒径为16μm,包封率为82.4%,符合药典要求,所建立的丁香酚紫外分光光度测定法,方法简单易行。在1～10μg/ml浓度范围内,标准曲线方程为：A=0.0171C＋0.0014（r=0.9994）,即在该浓度范围内平均回收率为98.70%,稳定性好,可用于丁香油微囊中丁香酚的测定。
- 华彩丽陈华涛宋晓平
- 关键词：丁香油微囊复合凝聚法紫外-可见分光光度法
- 用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法
- 本发明公开了一种用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法，以山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列BLG5作为5’端同源臂，以山羊β-乳球蛋白基因3’端包含第6、第7外显子及下游的序列BLG3作为3’端同源臂...
- 靳亚平胡林勇王爱华张涌李倩陈华涛
- 文献传递
- 奶山羊BLG基因敲除载体的构建
- 天然的BLG是婴儿牛羊乳过敏症的主要的过敏原之一。乳汁中BLG过敏原的消除是消除过敏,提高乳品质量的重要手段。目前的方法虽然对降低BLG过敏症有一定的效果,但不能从根本上解决BLG的致敏性问题。本研究目的在于构建奶山羊B...
- 陈华涛
- 关键词：基因敲除细胞转染
- 文献传递
- 山羊RORα基因的克隆、表达载体构建及功能分析被引量：7
- 2022年
- 旨在克隆山羊维甲酸相关孤儿受体α(RORα)基因并构建其真核表达载体,然后利用生物信息学工具系统分析RORα的生物学特性,最后对其在山羊生物钟系统中的作用机制进行初步探究。本研究以1只健康的12月龄雄性西农萨能奶山羊为试验动物,提取其肝组织总RNA,经逆转录PCR反转录为cDNA后,利用常规PCR扩增山羊RORα基因的编码区(coding sequence,CDS)片段,使用同源重组法将其与pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体相连接;重组载体经PCR、酶切和测序鉴定后,将阳性质粒命名为pcDNA3.1-3HA-gRORα;将pcDNA3.1-Puro-N-3HA和pcDNA3.1-3HA-gRORα质粒分别转染至HEK293T细胞后,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blotting,WB)技术检测山羊RORα的表达;同时利用ExPASy、ProtScale等软件对山羊RORα基因进行系统的生物信息学分析。另外,使用同源重组法分别构建含有山羊生物钟基因BMAL1和NR1D1启动子片段的pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc及pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc的荧光素酶报告质粒,并通过双荧光素酶报告试验探究山羊RORα蛋白调控BMAL1和NR1D1基因启动子转录活性的作用机制。PCR、酶切和测序鉴定结果表明,pcDNA3.1-3HA-gRORα重组质粒构建成功;qPCR和WB结果显示,pcDNA3.1-3HA-gRORα转染组RORα基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平均显著高于pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组(P<0.01)。生物信息学分析结果显示,山羊RORα基因CDS区序列与绵羊、牛和猪的相似性较高,分别为97.5%、97.1%和95.2%。山羊的RORα蛋白是一种亲水性蛋白。二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,有信号肽的概率较小,无跨膜区;三级结构与小鼠和人的RORα蛋白差异性极小,三者具有高度相似性。此外,PCR、酶切和测序结果表明,pGL4.10-BMAL1-Promoter-Luc和pGL4.10-NR1D1-Promoter-Luc重组质粒构建成功。双荧光素酶报告试验结果表明,山羊RORα蛋白可以显著上调�
- 高登科赵泓淙董浩靳亚平陈华涛
- 关键词：山羊真核表达载体生物信息学分析生物钟
- 山羊隐花色素2基因真核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2022年
- 为了构建山羊隐花色素2(CRY 2)基因的真核表达载体,分析CRY2蛋白的基本特性,本试验采用逆转录PCR扩增山羊CRY 2基因的编码序列(CDS),并以同源重组的方式将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,获得pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HEK293T细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测山羊CRY 2基因在mRNA和蛋白水平的表达变化;同时利用生物信息学软件对CRY2蛋白的基本理化性质和功能进行预测和分析。结果显示:pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒的酶切和测序结果与预期一致;转染HEK293T细胞后,pcDNA3.1-3HA-gCRY2转染组CRY 2 mRNA的相对表达量比pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组高600倍左右(P<0.001),CRY2蛋白成功表达;山羊、小鼠和人等哺乳动物CRY 2基因CDS区具有较高的相似性;CRY2蛋白不存在信号肽和跨膜区,预测显示其可能与ARNTL、CLOCK、PER1和PER2等蛋白互作。结果表明,本试验成功构建了山羊CRY 2基因的真核表达载体,并预测分析了山羊CRY2蛋白的基本理化特性,为探究山羊CRY 2基因及其编码蛋白的生物学功能提供了科学依据。
- 马白荣张海森高登科李超靳亚平靳亚平
- 关键词：山羊昼夜节律生物信息学
- 小鼠RNA结合蛋白QKI-5的生物信息学和组织表达分析及其过表达对癌症相关基因表达的影响被引量：1
- 2023年
- 【目的】旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5(Qki-5)的真核表达载体,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征,检测该基因的组织表达谱,并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响。【方法】提取小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区(Coding Sequence,CDS)全长,将获得的目的片段与线性化载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接以获得pcDNA3.1-mQki-5。通过在线软件对Qki-5基因序列及其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Qki-5基因在小鼠不同组织中的表达谱,同时使用免疫组织化学技术检测QKI-5蛋白在小鼠肝脏组织的表达分布。之后,将pcDNA3.1-mQki-5重组质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒分别转染至AML12细胞,通过qPCR和Western Blotting(WB)检测Qki-5基因在mRNA和蛋白水平的表达,并进一步检测Qki-5基因在AML12细胞中过表达后对癌症相关基因表达的影响。【结果】成功构建了pcDNA3.1-mQki-5真核表达载体;小鼠Qki-5基因的CDS区长度为1026 bp,共编码341个氨基酸;小鼠QKI-5蛋白为亲水性蛋白,不含跨膜结构和信号肽,存在26个磷酸化位点,且小鼠QKI-5蛋白的三级结构与人和大鼠完全一致;在检测的12个组织中,Qki-5在小鼠全脑的表达量最高,在十二指肠的表达量最低;QKI-5在小鼠肝脏组织中主要表达于肝细胞细胞核中;在AML12细胞过表达QKI-5后,会引起癌症相关基因P53和Ccnd1的mRNA表达水平显著升高。【结论】研究成功构建了小鼠Qki-5基因真核表达载体;Qki-5基因在小鼠全脑、肺脏等组织中表达量较高;QKI-5主要表达分布于小鼠肝细胞细胞核内;此外,在AML12细胞中QKI-5的过表达会引起P53和Ccnd1的表达水平升高。研究为进一步探究小鼠Qki-5基因的功能提供了关键材料。
- 王逢博高登科李超李丹刘薇张海森杨王浩靳亚平靳亚平
- 关键词：RNA结合蛋白表达谱癌症
- 山羊β-乳球蛋白基因打靶载体的构建
- 2011年
- 【目的】构建山羊β-乳球蛋白(BLG)基因打靶载体,以期用人乳白蛋白(hALA)基因的编码区置换山羊BLG基因的编码区,借助BLG的内源性调控序列指导hALA的表达。【方法】以山羊血液基因组为模板PCR扩增获得BLG基因的5′端侧翼序列(BLG5)、第5外显子和第5内含子的部分序列(E5)和3′端侧翼序列(BLG3),同时以人血液基因组为模板克隆了hALA基因的基因组序列(ALA),并将上述片段连接到克隆载体pMD18 T-simple或pBluescript KS(-),得到载体pB5T,pB3T,pAKS和pAEKS。对pB5T进行亚克隆,将BLG5连接到pAEKS中,构建载体pBAE;最后将BLG5-hALA-E5和BLG3分别连接到打靶载体ploxpII中,标记为pBAT。【结果】经酶切和/或测序等鉴定,以上载体均正确。【结论】构建得到了旨在将hALA定向插入到山羊乳蛋白基因座位的打靶载体。
- 胡林勇陈华涛李倩徐晓彬王爱华靳亚平
- 关键词：基因打靶乳腺生物反应器Β-乳球蛋白Α-乳白蛋白山羊
- 奶山羊BLG基因敲除载体的构建被引量：2
- 2011年
- 根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。
- 陈华涛李倩胡林勇王爱华靳亚平刘军杨艳
- 关键词：奶山羊基因敲除打靶载体
- 牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用
- 本发明公开了牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，属于基因的克隆、真核表达载体的构建技术领域，本发明提供的牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，成功构建了牛RORα基因的真核表达载体，补充了牛RO...
- 陈华涛秦新喜刘薇靳亚平王逢博杨王浩赵泓淙张粉丽
