周晴
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
- 供职机构：浙江大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响被引量：3
- 1999年
- 采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存，在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后，３８℃水浴快速复温，离心洗脱冷冻保护剂，检测胚胎神经细胞的活性与功能，并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞，存活率为７６．４±８．３％，膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降，但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系。
- 胡军祥姜玉新周晴郑斯涌曾跃武冯春木
- 关键词：胚胎神经细胞脊髓移植玻璃化冻存活性
- 转人γIFN基因烟草的初步研究被引量：1
- 2000年
- 以 TA克隆法构建中间载体 PUCF1,再构建γ干扰素基因表达载体 PBIF1.通过农杆菌转化导入烟草叶圆片外植体 .经 4轮梯度卡那霉素 (Kanamycin)递增筛选 ,获得抗性植株 .经 PCR证实其中部分植株已将人γ干扰素基因片段整合到烟草基因组中 ,从而为成功地建立烟草植物反应器生产人γ干扰素基因奠定了基础 .
- 杨蓉朱睦元周晴
- 关键词：烟草农杆菌介导转基因植株
- 重组细胞因子融合蛋白的研究进展
- 1998年
- 应用基因工程实验技术,将细胞因子蛋白分子重组成一种融合蛋白分子.这种新型的融合蛋白分子,可发挥超越其单因子的生物学活性和/或具有便于分离纯化、检测等特性.因此它不仅在理论上有着崭新的内涵值得深入探讨,而且在应用上也具有潜在的广阔前景.本文对此领域的研究进展作一综述.
- 周晴马志章
- 关键词：基因重组融合基因融合蛋白细胞因子
- 人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白His6融合表达及一步纯化被引量：4
- 2000年
- 将人γ干扰素 /β肿瘤坏死因子融合蛋白 ( hγTNF-β)重组基因克隆于表达载体 p ET2 8,构建成T7lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E.coli BL 2 1 ( DE3 ) .经 IPTG( 1 m M)诱导表达 ,阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗表达带 ,其分子量 ( 3 2 k Da)与目的蛋白 His6-γ TNF-β)理论分子量相符 .薄层扫描与溶解性分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 4 5%以上 ,主要为不溶性的包涵体( IBs) .离心分离 IBs产物 ,溶于 7M尿素中 ,然后通过 Ni柱进行亲和层析 ,即可获得一步纯化的表达产物(纯度为 96%、回收率为 91 % ) .纯化产物再经复性缓冲液稀释复性 ,其细胞毒比活性与抗病毒比活性分别达到 1 .2× 1 0 7～ 2 .0× 1 0 7u/m gp和 6.6× 1 0 5～ 7.2× 1 0
- 周晴余建法马志章丁仁瑞
- 关键词：Γ干扰素
- 人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达被引量：1
- 1999年
- 利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白．
- 周晴张惟杰马志章应红宇丁仁瑞
- 关键词：融合蛋白
- 人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白原核细胞高效表达研究被引量：2
- 1998年
- 利用ＤＮＡ重组技术，在构建人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３４Ｘ１３）表达质粒，取得高效表达的基础上，再将人β肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦβ１４３，Ｎ端缺失２３ａａ）的ＤＮＡ片段亚克隆到该质粒外源编码序列的３′端，构建成人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈγＴＮＦβ）的重组基因表达质粒，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。含有ｈγＴＮＦβ重组基因的阳性菌经温度（４２℃）诱导，在λＰＲＰＬ启动子的控制下，高效表达了ｈγＴＮＦβ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示，在理论分子量３０ｋＤ处出现特异的目的蛋白表达带，表达量约占全菌蛋白的１８％。表达产物主要以不溶性的包涵体（ＩＢｓ）形式存在，通过分离纯化ＩＢｓ产物及复性处理，表达产物的抗病毒比活性与细胞毒比活性分别达到５０～５８×１０７ｕ／ｍｇｐ和４２～４９×１０７ｕ／ｍｇｐ。
- 周晴马志章冯根生冯根生张惟杰陈常庆
- 关键词：融合蛋白TNF干扰素原核细胞
- 淋巴细胞活化辅助分子与信号转导被引量：2
- 1996年
- 淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章，周晴，丁仁瑞（杭州大学生命科学学院，杭州３１００２８）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｇｅｎｔｈｒｏｕｇｈａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｌ...
- 马志章周晴丁仁瑞
- 关键词：淋巴细胞信号转导
- 人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究
- 1998年
- 应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni^(2+)-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map.
- 余建法周晴马志章丁鸣徐建芬丁仁瑞
- 关键词：融合蛋白分离纯化
- 信号转导抑制剂对TNFβ诱导L929细胞凋亡的研究被引量：2
- 2001年
- 本文采用 FDA- PI荧光染色 ,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人 TNFβ对 L92 9细胞的细胞毒效应 ,结果表明 TNFβ主要是诱导 L92 9细胞以凋亡的形式死亡 .实验还采用 8种信号转导抑制剂 ,观察它们对 TNFβ杀伤 L92 9细胞的影响 ,以探讨细胞凋亡的信号转导途径 .初步研究表明 :磷脂酶 A2 ,Ca2 + 通道、丝氨酸蛋白酶的抑制剂能抑制 TNFβ对 L92 9细胞的杀伤 ,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用 ;相反地 ,蛋白激酶 C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡 ;而环加氧酶、磷脂酰肌醇 -
- 李芳芳杨帆周晴马志章丁仁瑞邱莲女周永列
- 关键词：L929细胞细胞凋亡细胞毒效应抑制率
- 人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究被引量：4
- 2000年
- 本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产物大部分以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤 ,70mol/L脲变性溶解 ,用Ni2 + 亲和层析一步快速纯化 ,所得His6 TNFβ的纯度达 90 %以上 ,回收率在 90 %左右。纯化产物稀释复性后 ,其细胞毒活性为 (0 5～ 1 0 )× 10 6U/mg蛋白左右。这些研究结果将为制备重组人TNFβ缺失体以及进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 徐建芬周晴马志章余建法华明丁仁瑞
- 关键词：肿瘤环死因子经法TNFΒ
