魏晓楠
- 作品数:3 被引量:5H指数:1
- 供职机构:集美大学食品与生物工程学院更多>>
- 发文基金:福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域:化学工程生物学更多>>
- 大肠杆菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸的制备方法
- 本发明公开了一种大肠杆菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的制备方法,其基本过程为:首先将含有S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAMS)的大肠杆菌工程菌株BL21/pET-28a-SAMS与酿酒酵母分别在适宜的条件...
- 杜翠红魏晓楠
- 文献传递
- 大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸被引量:1
- 2015年
- 目的为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺。方法将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经Eco RⅠ和NotⅠ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体p ET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒p ET-28a-SAMS。将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21(DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)。采用混合悬浮培养法,利用含有SAMS基因的重组大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化。结果经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒p ET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)构建正确。大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5 h,添加5%甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/L Mg Cl2·6H2O、30 mmol/L L-甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系。最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L。结论本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径。
- 魏晓楠燕龙龙李婷李欢杜翠红
- 关键词:大肠埃希菌酿酒酵母偶联S-腺苷甲硫氨酸
- S--腺苷甲硫氨酸(SAM)在大肠杆菌中的合成
- S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是广泛存在于生物体内的一种重要中间体,参与多种类型的生化反应,主要包括转甲基、转硫和转氨丙基。在细胞内,SAM是由S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosy-L-methionine synth...
- 魏晓楠
- 关键词:大肠杆菌S-腺苷甲硫氨酸分离纯化
- 文献传递