陈佳全
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 慢病毒介导Yes相关蛋白基因过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞增殖
- 2017年
- 目的探讨慢病毒介导Yes相关蛋白（YAP）过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞（miPSC-EC）增殖的机制。方法诱导小鼠诱导性多能干细胞（miPSC）为内皮细胞（EC），慢病毒介导质粒pPGK-2Flag-YAP转染miPSC-EC，嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株miPSC-EC/YAP。Western blot验证YAP是否成功转染miPSC-EC，并检测转染YAP后miPSC-EC内人第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）等蛋白的表达，同时应用噻唑蓝（MTT）比色法检测YAP对miPSC-EC增殖的影响。结果miPSC诱导分化所得细胞形态符合EC特征，几乎都表达EC标志血小板内皮细胞黏附分子（CD31）。Western blot结果显示，转染YAP的miPSC-EC中YAP高表达（未转染细胞YAP几乎不表达），miPSC-EC/YAP组较未转染组PTEN相对表达量明显降低（0.635±0.017比0.879±0.034, P=0.023），p-Akt/相对表达量显著升高（0.450±0.025比0.073±0.018, P=0.007）。同步化之后24、48、72 h，miPSC-EC/YAP组吸光度（A）值较未转染组显著增加（0.113±0.004比0.077±0.004，P=0.000；0.368±0.010比0.199±0.006，P=0.000；0.716±0.004比0.418±0.018，P=0.000）。结论成功诱导miPSC为EC，建立过表达YAP的细胞株miPSC-EC/YAP。过表达YAP抑制PTEN的表达，提高Akt磷酸化。YAP可能通过参与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路促进miPSC-EC的增殖。
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- 关键词：诱导性多能干细胞内皮细胞
- 慢病毒介导的miPSC-EC YAP基因过表达及稳定感染细胞系的建立
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- 慢病毒介导Yes相关蛋白基因过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞增殖的实验研究
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- 慢病毒介导的miPSC-EC YAP基因过表达及稳定感染细胞系的建立
- 2016年
- 目的建立稳定过表达Yes相关蛋白(YAP)的小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞(miP SC-EC)系,为miP SC-EC过表达YAP基因的体内外实验研究奠定基础。方法将模板质粒(p CMV-Flag-YAP2-5SA)改建成慢病毒表达质粒(p PGK-2Flag-YAP2-Puro);将慢病毒表达质粒与包装质粒组成共包装系统转染293FT细胞;包装慢病毒,收集病毒原液,超滤浓缩,测定滴度。诱导miP SC分化为EC,观察其形态特征,并行组织化学鉴定。包装好的慢病毒感染miP SC-EC,嘌呤霉素筛选稳定感染的细胞系miP SC-EC/YAP,并用RT-PCR及Western blot方法验证。结果慢病毒表达质粒(p PGK-2Flag-YAP2-Puro)构建成功,并成功包装YAP基因过表达慢病毒,滴度达到1.2×109 TU/ml。miP SC诱导分化所得细胞符合EC形态特征,几乎都表达EC标志CD31。转染YAP的miP SC-EC中YAP m RNA表达水平较未转染细胞明显升高,YAP蛋白高表达(未转染细胞中YAP蛋白几乎不表达)。结论成功构建YAP基因慢病毒过表达载体,诱导miP SC分化为EC,成功建立YAP基因稳定感染细胞系miP SC-EC/YAP。
- 张雪郝长宁曾庆坛阚科佳陈佳全吴圣俊严泽振张岚
- 关键词：慢病毒诱导性多能干细胞
