陈瑶
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省自然科学基金更多>>
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- CD137-CD137L信号通路通过活化T细胞核因子c1促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生被引量：4
- 2016年
- 目的探讨CD137-CD137L信号通路是否通过活化T细胞核因子c1（NFATc1）促进动脉粥样硬化斑块内血管新生。方法将载脂蛋白E基因敲除小鼠分为3组，即对照组、CD137刺激组和CD137抑制组，每组均为5只小鼠，采用免疫组织化学法检测小鼠主动脉斑块内的CD31含量。将小鼠内皮细胞（bend．3）分为4组，即空白对照组、IgG同型对照组、CD137刺激组和CD137抑制组，采用Western blot检测内皮细胞的NFATcl总蛋白和核蛋白水平。采用流式细胞术检测内皮细胞膜表面的CD137蛋白表达水平。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测内皮细胞裂解液中的CD137蛋白水平。采用Transwell迁移实验检测内皮细胞的迁移能力。将内皮细胞分为5组，即对照组、CD137刺激组、沉默NFATc1细胞株＋CD137刺激组、CD137抑制组和过表达NFATc1细胞株＋CD137抑制组，检测各组内皮细胞的管腔形成能力。结果（1）CD137刺激组的斑块内CD31表达水平高于对照组（1191±187比115±30，P〈0．05）；CD137抑制组的斑块内CD31表达水平（450±92）低于CD137刺激组（P〈0．05）。（2）CD137刺激组内皮细胞内的NFATc1总蛋白（2．18±0．30比1．00±0．00，P〈0．05）和核蛋白（3．07±0．03比1．00±0．00，P〈0．05）水平均高于IgG同型对照组；CD137抑制组内皮细胞内的NFATc1总蛋白（0．84±0．09）和核蛋白（0．82±0．04）水平均低于CD137刺激组（P均〈0．05）。（3）流式细胞术显示，肿瘤坏死因子．d刺激后内皮细胞的CD137荧光强度高于正常内皮细胞（5163±329比1660±162，P〈0．05）。（4）ELISA显示，肿瘤坏死因子-α刺激后内皮细胞裂解液中的CD137蛋白水平高于正常内皮细胞[（573．4±23．7）pg／mg比（69．5±16．7）pg／mg，P〈0．05]。（5）CD137刺激组的内皮细胞迁移数量多于IgG同型对照组（1．19±0．13比1．00±0．00，P〈0．05）；CD137抑制组的内皮细胞迁移
- 翁嘉懿严金川陈瑶王中群王翠平邵晨
- 关键词：动脉粥样硬化抗原CD137
- CD137-CD137L信号通路对小鼠动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞钙化的影响被引量：7
- 2016年
- 目的 探讨CD137-CD137L信号通路对动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞（VSMC）钙化的影响.方法 （1）体内实验：载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-小鼠）15只,8周龄,抓阄法随机分为3组,CD137刺激组（腹腔注射刺激型CD137抗体200μg）,CDl37抑制组（腹腔注射抑制型CD137抗体200 μg＋刺激型CD137抗体200μg）和对照组,每组5只小鼠.采用Von kossa染色法检测各组小鼠主动脉斑块钙化程度.免疫组织化学染色检测小鼠主动脉斑块中骨形成蛋白-2（BMP-2）及Runx2蛋白表达水平.（2）体外细胞实验：采用组织块贴壁法培养C57BL/6J小鼠胸主动脉VSMC.实验分为4组,对照组（DMEM＋10％ FBS＋10 mmol/L β-甘油磷酸钠）、CD137刺激组（刺激型CD137抗体）、CD137抑制组（抑制型CD137抗体＋刺激型CD137抗体）、同型对照组（IgG2b）.分别采用Vonkossa染色和甲基百里香酚蓝法检测细胞钙化及细胞内钙含量.采用实时荧光定量PCR法检测BMP-2和Runx2成骨相关蛋白mRNA表达水平.采用Western blot法检测各组主动脉斑块中BMP-2和Runx2蛋白表达水平.结果 （1）体内实验：CD137刺激组ApoE-/-小鼠主动脉斑块钙化面积大于对照组[（1.75 ±0.33）×10^4 μm2比（0.23 ±0.07）×10^4 μm2,P＜0.01],而CD137抑制组则小于CD137刺激组[（0.83 ±0.30）×10^4 μ,m2比（1.75±0.33）×10^4 μm2,P ＜0.05].CD137刺激组BMP-2和Runx2蛋白表达水平均高于对照组（P均＜0.01）,而CD137抑制组则均低于CD137刺激组（P均＜0.05）.（2）体外细胞实验：CD137刺激组VSMC钙化程度高于对照组,细胞内钙离子含量高于对照组[（0.001 3±0.000 2）mmol/mg蛋白比（0.000 7±0.000 2）mmol/mg蛋白,P＜0.01],BMP-2和Runx2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P均＜0.05）.而CD137抑制组VSMC钙化程度较CD137刺激组弱、细胞内钙含量少[（0.0009±0.000 2）mmol/mg蛋白比（0.001 3 ±0.000 2）mmol/mg蛋白,P＜0.05],BMP-2和Runx2 mRNA和蛋白表达水平亦均�
- 陈瑶严金川翁嘉懿王中群王翠平邵晨
- 关键词：血管
- 小鼠主动脉环血管新生实验模型的优化
- 2016年
- 目的：建立优化体外培养小鼠主动脉环血管新生实验模型的条件和方法。方法：分离C57BL/6小鼠的胸主动脉,剔除主动脉周围的脂肪及结缔组织,使用Ⅱ型胶原酶消化动脉,剥离血管外膜,将血管剪成0.5 mm长的动脉环,置于预先包被有鼠尾Ⅰ型胶原的96孔板中培养,给予DMEM＋2.5%胎牛血清,DMEM＋10%胎牛血清或DMEM＋2.5%胎牛血清＋血管内皮生长因子（VEGF,终浓度为50 ng/m L）100μL/孔,覆盖胶原表面。倒置显微镜下观察动脉环新生微血管。免疫荧光染色鉴定内皮细胞。结果：鼠尾Ⅰ型胶原包被的96孔板（DMEM＋2.5%胎牛血清）内新生微血管数量明显多于24孔板（t=-6.000,P〈0.05）。DMEM＋10%胎牛血清组新生微血管数量明显高于DMEM＋2.5%胎牛血清组和DMEM＋2.5%胎牛血清＋VEGF组。DMEM＋10%胎牛血清组培养24 d后小鼠主动脉环开始出芽,68 d后动脉环新生微血管分支、数量及长度达到高峰。结论：优化后的方法可以得到生长状态良好,出芽率高,纯度高的离体小鼠动脉环血管新生实验模型。
- 翁嘉懿严金川陈瑶李波李晓阳徐源刘俊
- 关键词：主动脉环血管新生
