李艳秋
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制被引量：7
- 2009年
- 采用化学合成法分别合成靶向草鱼呼肠孤病毒(GCRV)RNA基因组节段L2片段上的RNA聚合酶基因(RdRp)和S4片段上的外衣壳蛋白基因(OCP)的小干扰RNA分子siRNA-RdRp1 286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117,脂质体转染法转染草鱼肾脏组织细胞系CIK。转染6 h后用草鱼呼肠孤病毒感染细胞,48 h后收集感染细胞的培养液,微量培养法测定病毒lgTCID50/0.1mL值。以细胞管家基因-βactin mRNA水平为参照,RT-PCR法检测呼肠孤病毒siRNAs靶基因的mRNA水平。病毒滴度测定结果表明:转染siRNA-RdRp1 286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117三种siRNAs的病毒滴度lgTCID50/0.1 mL分别为4.41±0.16、3.83±0.44和1.94±0.42,极显著低于阳性感染对照组的病毒滴度(7.92±0.52,P<0.01),转染siRNA阴性对照组的病毒滴度无明显变化(7.50±0.17,P>0.05)。RT-PCR检测结果显示:与阳性感染对照组比较,转染siRNA-RdRp1286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117后的CIK细胞中GCRV mRNA水平显著下降,抑制率分别为82.08±2.15%、89.19±1.14%和92.62±0.17%,而转染阴性对照组对GCRV mRNA水平没有显著的影响(P>0.05)。
- 李兵范玉顶李艳秋徐进周勇曾令兵
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒RNA干扰
- 草鱼呼肠孤病毒VP6基因与大肠杆菌LTB基因植物融合表达载体的构建
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒VP6基因大肠杆菌LTB基因植物表达载体
- 化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制
- 采用化学合成法分别合成靶向草鱼呼肠孤病毒(GCRV) RNA分段基因组L2片段上的RNA聚合酶基因(dRp)和S4片段上的外衣壳蛋白基因(OCP)的小干扰RNA分子siRNARdRp1286、siRNA-RdRp1441...
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- 关键词：RNA干扰(RNAI)
- 斑点叉尾鮰出血病病原呼肠孤病毒的分离与鉴定
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- 关键词：斑点叉尾鮰出血病呼肠孤病毒
- 草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建被引量：8
- 2009年
- 以据草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白的全基因序列(GeneBank AF403394)为模板,采用RT-PCR构建了草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建。结果显示:实验构建的pCR 2.1-VP6重组质粒含有NcoⅠ和BglⅡ酶切位点;pCR 2.1-VP6重组质粒经PCR扩增和测序显示含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因读码框片段。将目的片段VP6酶切、克隆到携带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pCAMBIA1302中,再经酶切、PCR扩增和序列测定显示,pCAMBIA1302-VP6含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因片段,说明已插入植物表达载体pCAMBIA1302绿色荧光蛋白基因前,成功构建了融合表达草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白和绿色荧光蛋白的植物表达载体pCAMBIA1302-VP6。
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒VP6基因植物表达载体
- 斑点叉尾鮰出血病病原呼肠孤病毒的分离与鉴定被引量：12
- 2009年
- 采用细胞培养分离病毒技术从患出血病的斑点叉尾鮰体内分离到一株新病毒。经人工感染试验、电镜观察、理化特性试验以及病毒基因组分析,确认为斑点叉尾鮰呼肠孤病毒（Channel Catfish Reovirus,CCRV）。人工感染试验可复制出与自然发病相同的症状;病毒感染斑点叉尾鮰卵巢组织细胞系和肾脏组织细胞系可产生典型细胞病变效应。感染细胞的超薄切片电镜观察结果显示,病毒在细胞质内复制,呈晶格状排列,病毒颗粒具双层衣壳,无囊膜,直径约60-70nm;冻融、56℃1h、氯仿、乙醚等处理对病毒滴度影响不显著,65℃1h处理病毒滴度下降极显著。病毒基因组SDS-PAGE分析和核酸酶敏感试验结果表明,其基因组由11个分段的RNA核酸节段组成,节段大小范围为0.9-4.4kb,可分为三大类,即L1、L2、L3,M1、M2、M3和S1、S2、S3、S4、S5,为典型的水生呼肠孤病毒（Aquareovirus）基因组结构。病毒基因组S4节段的克隆与序列分析结果表明,其与GenBank中登录的草鱼呼肠孤病毒S4节段（AF403396）、美洲金体鳊呼肠孤病毒（GSRV）的S4节段（AF403407）长度均为909bp,其序列同源性分别为99％和90％。
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- 关键词：斑点叉尾鮰出血病呼肠孤病毒
- 草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建
- 根据草鱼呼肠孤病毒(GCRY) VP6蛋白的全基因序列(GeneBank AF403394)设计并合成引物，从感染草鱼呼肠孤病毒的草鱼肾细胞系(CIK)中提取病毒核酸作为模板，采用RT-PCR扩增方法，获得了约1.3Kb...
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒VP6基因植物表达载体
- 化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制
- 李兵范玉顶李艳秋徐进周勇曾令兵
- 关键词：RNA干扰(RNAI)
