姚静
- 作品数：10 被引量：46H指数：3
- 供职机构：南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 噬菌体介导的结核分枝杆菌Rυ2346c基因敲除株的构建及其毒力初步研究
- 2018年
- 目的利用分枝杆菌噬菌体重组系统构建结核分枝杆菌Rυ2346c基因敲除株，体内感染小鼠肺组织，观察Rυ2346c基因的毒力，从而探讨结核分枝杆菌Rυ2346c基因功能。方法构建同源交换位点，随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组，获得噬菌粒，将噬菌粒导人耻垢分枝杆菌，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对结核分枝杆菌进行转染，将转染后的结核分枝杆菌涂布到潮霉素抗性的固体培养基，37℃培养4周，挑取单克隆，通过PCR验证基因敲除成功，将野生株（wildtype，wT）及敲除株（knockout，KO）结核分枝杆菌感染C57BL／6J小鼠肺组织，6～8周后观察小鼠死亡率、小鼠肺组织炎性反应程度及肺组织结核分枝杆菌体外培养菌落形成数。两组间比较采用配对t检验，率的比较采用X2检验。结果经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，且为所需目的基因片段，成功切除靶片段，体内感染小鼠6～8周，KO株感染小鼠肺组织后，体外菌落形成数明显低于WT株感染（15．0±0．8比90．0±1．5，t=23．0361，P〈0．05），小鼠肺组织炎性反应程度明显轻于wT株感染（1040±89比1960±56，t=7．1016，P〈0．05），其小鼠总死亡率明显低于wT株感染（53％比20％，3（X2=6．1112，P〈0．05）。结论成功构建了噬菌体介导的结核分枝杆菌Rυ2346c基因敲除株，为Rυ2346c基因功能的研究奠定了基础。
- 陈晓林陈思遐姚静舒磊邓凯丽冯旰珠
- 关键词：细菌噬菌体
- LncRNA NEAT1在肺部疾病中的研究进展
- 2023年
- 长链非编码RNA(LncRNA)广泛参与细胞内染色质修饰、转录调节、核内运输、蛋白功能调节等多种生物学过程,与机体免疫、代谢等多种关键生理功能密切相关。NEAT1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1)是一种新近发现的LncRNA,为构成细胞核亚结构小体旁斑的重要成分,已被证实能够通过与多种miRNA结合调控其下游蛋白表达,进而调节炎症因子的表达、上皮-间质转化、自噬、凋亡、增殖、迁移等生物学过程,其异常表达在肺部疾病(如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺炎、肺纤维化、肺癌)的发病过程中发挥重要作用,并且与非小细胞肺癌的预后及抗肿瘤药物敏感性密切相关,有望成为新的生物学标志物及治疗干预靶点。本文主要就NEAT1在肺部疾病中作用的最新研究进展进行综述。
- 周雯妍乔立仪张怡刘广宇谢天博姚静
- 关键词：RNA肺疾病
- 泛耐药肺炎克雷伯菌血液分离株耐药机制研究被引量：16
- 2014年
- 目的探讨泛耐药肺炎克雷伯菌血液分离株耐药机制。方法对我院ICU住院患者血液分离的泛耐药肺炎克雷伯菌株,采用K-B纸片法药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)方法对该菌株可能携带的β-内酰胺酶编码基因及膜孔蛋白编码基因、与氨基糖苷类药物耐药相关的氨基糖苷类修饰酶编码基因、与氟喹诺酮类药物耐药相关基因以及与利福平耐药相关的aar基因进行检测,并对阳性产物进行测序,测序结果作BLAST对比分析。结果该株泛耐药肺炎克雷伯菌株检出TEM、SHV、DHA3种β-内酰胺酶编码基因,OmpK35膜孔蛋白编码基因检测呈阳性,OmpK36膜孔蛋白编码基因检测呈阴性,即该菌OmpK36膜孔蛋白编码基因为缺失型;aac(6')-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶编码基因阳性;氟喹诺酮类药物作用靶位gyrA基因第83位密码子存在TCC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I)、parC基因第80位密码子存在AGC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I),且氟喹诺酮类药物作用靶位保护蛋白编码基因qnrB检测阳性;利福平获得性耐药基因arr检测阳性。结论泛耐药肺炎克雷伯菌同时存在多种耐药机制,从而对不同类抗菌药物形成耐药,给临床治疗带来极大的挑战;加强对该类菌株的监控、减少其在医院的传播、积极探寻对该类菌株的有效治疗措施迫在眉睫。
- 孙伏喜冯旰珠姚静崔进高天明赵水娣
- 关键词：泛耐药血流感染Β-内酰胺酶
- 重组蛋白Rv2346c抑制巨噬细胞对结核分枝杆菌的免疫灭活效应
- 2017年
- 目的探讨重组蛋白Rv2346c对卡介苗(BCG)感染鼠巨噬细胞(RAW264.7)后的免疫效应的影响及其机制。方法通过DNA合成、基因扩增、载体构建、诱导表达、纯化等过程制备重组蛋白Rv2346c;利用Cell Counting Kit-8(CCK8)方法检测RAW264.7增殖水平;采用菌落形成试验评估BCG生长情况;运用ELISA方法检测BCG和RAW264.7共培养上清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL)-6的浓度;采取Western blot方法检测RAW264.7细胞中核转录因子κB(NF-κB)p65的表达水平。结果 DNA测序及Western blot检测证实成功制备重组蛋白Rv2346c;BCG可以抑制RAW264.7细胞增殖(P<0.05),而RAW264.7细胞对BCG有灭活作用(P<0.05);重组蛋白Rv2346c可以增强BCG对RAW264.7细胞增殖的抑制作用(P<0.05),并降低RAW264.7对BCG的灭活效应(P<0.05);Rv2346c还可以抑制RAW264.7分泌TNF-α和IL-6(P<0.05),并抑制NF-κB p65的表达(P<0.05)。结论重组蛋白Rv2346c可以抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7对BCG的免疫灭活效应,该作用可能与抑制细胞因子分泌和NF-κB p65活化有关,具体机制值得进一步深入探讨。
- 姚静邵燕杜兴冉冯旰珠
- 关键词：巨噬细胞结核分枝杆菌
- 白杨素对激素抵抗型支气管哮喘小鼠模型的干预作用被引量：3
- 2015年
- 目的 探讨白杨素对激素抵抗型支气管哮喘小鼠模型的干预作用.方法 利用卵清蛋白致敏和激发小鼠,建立支气管哮喘模型,利用脂多糖诱导激素抵抗.48只雌性BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为对照组（A组）、卵清蛋白组（B组）、脂多糖＋卵清蛋白组（C组）、脂多糖＋卵清蛋白＋地塞米松组（D组）、脂多糖＋卵清蛋白＋白杨素组（E组）和脂多糖＋卵清蛋白＋地塞米松＋白杨素组（F组）各8只.在第1、14天,A组腹腔注射磷酸盐缓冲液,B、C、D、E、F组腹腔注射卵清蛋白（20 μg）/氢氧化铝混合液致敏;在第27天,A、B组进行磷酸盐缓冲液滴鼻,C、D、E、F组进行脂多糖（10 μg）滴鼻.在第28、29、30天,A组以磷酸盐缓冲液进行雾化30 min,B、C、D、E、F组以1％卵清蛋白磷酸盐缓冲液雾化30 min激发.D组在雾化前一天腹腔注射磷酸盐缓冲液,每次雾化前30 min腹腔注射地塞米松（3 mg/kg）;E组雾化前一天及每次雾化前lh腹腔注射白杨素（50 mg/kg）,F组为雾化前一天及每次雾化前1 h腹腔注射白杨素（50 mg/kg）、每次雾化前30 min腹腔注射地塞米松（3 mg/kg）.A、B、C组参照上述方法在雾化前一天及每次雾化前腹腔注射磷酸盐缓冲液.分别利用HE和PAS染色比较小鼠肺组织病理改变,显微镜下计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数,酶联免疫吸附（ELISA）法测定BALF中白细胞介素（IL）-4、IL-13及血清中lgE水平.结果 F组小鼠肺组织炎症损伤较C组明显减轻;D、E、F组气道杯状细胞占上皮细胞百分比均显著低于C组[（54.5±6.9）％、（53.3±8.2）％、（23.8±7.0）％比（71.3±12.2）％,均P＜0.01];E、F组BALF中白细胞总数均显著低于C组[（1.22±0.23）×10^4、（0.98±0.25）×10^4比（2.56±0.18）×10^4个/ml,均P＜0.01];D、F组IL-4水平均显著低于C组[（118±7）、（124±5）比（138±6） pg/ml,均P＜0.01];E、F组IL-13水平均显�
- 姚静杜强冯旰珠
- 关键词：哮喘激素抵抗白杨素小鼠
- 白杨素对哮喘模型小鼠肺组织核因子-κB表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 :观察白杨素对急性哮喘模型小鼠肺组织核因子(nuclear factor,NF)-κB表达的影响。方法 :24只雌性BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘组、白杨素组、布地奈德组,每组6只。使用卵白蛋白腹腔注射致敏,气道激发制备哮喘模型,白杨素组小鼠给予白杨素50 mg/kg灌胃,布地奈德组小鼠给予布地奈德雾化液雾化吸入。肺功能测定评价小鼠气道阻力,HE染色评价小鼠气道炎症,酶联免疫吸附(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4、IL-13和血清总Ig E的水平,Western blot检测肺组织NF-κB蛋白表达。结果 :哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,白杨素能够显著抑制哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性,白杨素能够抑制哮喘小鼠BALF中IL-4、IL-13和血清总Ig E水平。哮喘组小鼠肺组织高表达的NF-κB水平,经白杨素治疗后显著降低。结论:白杨素能够抑制哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性,其机制可能与抑制肺组织NF-κB的表达有关。
- 朱成华姚静杜强
- 关键词：白杨素哮喘气道炎症核因子-ΚB
- Klotho基因及其多态性在肿瘤中的研究进展被引量：1
- 2016年
- 人类Klotho基因位于染色体13q12区域,全长约50 kb。Klotho基因敲除小鼠表现出多种类似人类衰老的相关表型,并且与肿瘤抑制作用密切相关,其基因表达下调及基因多态性与多种肿瘤易患性之间有明显联系,如肺癌、胃癌、胰腺癌、宫颈癌等,反映其在临床诊疗中的重要应用价值。Klotho基因在少数肿瘤中显示出促癌效应,如卵巢癌,这种促癌效应可能与Klotho基因涉及众多信号通路,进而在肿瘤发生、发展中表现出组织特异性有关。
- 姚静冯旰珠
- 关键词：KLOTHO基因多态性肿瘤抑制
- 碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌医院暴发流行的耐药机制及同源性研究被引量：19
- 2016年
- 目的 研究临床分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）时间分布规律、耐药机制及菌株同源性,为预防控制医院感染提供依据。方法 自2011年1月分离出第1株CRKP后,对随后分离的所有CRKP实时监控;检测各分离株的主要耐药基因、膜孔蛋白基因突变及插入序列ISKpn6表达状况;对暴发流行期间分离的22株CRKP分别用凝胶电泳（PFGE）及多位点序列分型（MLST）法探讨其菌株同源性。结果 2011年1月-2013年12月共分离38株CRKP,其中2011年分离率为13.2%;2012年上半年分离率为57.9%,呈暴发流行;2012年下半年及2013年全年分离率分别为18.4%及10.5%。38株菌株皆产KPC-2酶,TEM-1、SHV的携带率及插入序列ISKpn6阳性率均为100%;DHA-1及LAP-2阳性率分别为47.4%及50%;膜孔蛋白编码基因OmpK35及OmpK36的突变率分别为94.7%及100%。PFGE显示,暴发流行期间22株CRKP分属A1-E 7个克隆,其同源性达75%以上;MLST显示,22株菌株的优势型为ST11及ST258,各占31.8%。结论 本次暴发流行CRKP同时存在多种耐药机制,以ST11及ST258型为主,加强综合预防控制措施能有效遏制该菌株传播流行。
- 张海峰姚静杜兴冉张扬高天明翁晓芹冯旰珠
- 关键词：肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药耐药机制同源性医院感染
- 产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类耐药机制研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制,为指导临床合理使用抗菌药物提供依据。方法两所三甲综合性医院临床分离的23株产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌,采用K-B纸片法药敏试验,聚合酶链反应(PCR)方法对氟喹诺酮类药物作用靶位编码基因gyrA、parC和可移动遗传元件介导的aac(6′)-Ⅰb-cr、qnrA、qnrB、qnrS、qepA基因进行检测,对阳性产物进行测序,测序结果作BLAST对比分析。结果 23株产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌检出拓普异构酶ⅡA亚单位编码基因,gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)的第83位密码子TCC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I),第87位密码子GAC→GGC有义突变(氨基酸序列D→G),且23株菌株均出现拓普异构酶ⅣC亚单位编码基因parC喹诺酮耐药决定区(QRDR)第80位密码子AGC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I);但23株产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌由可移动遗传元件可介导的氟喹诺酮类耐药相关基因(aac(6′)-Ⅰb-cr、qnrA、qnrB、qnrS、qepA)检测均为阴性。结论 23株产KPC型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的gyrA与parC基因QRDR区的有义突变是氟喹诺酮类药物耐药的主要机制,加重了其耐药性,给临床抗菌药物选择带来困难,需引起重视。
- 高天明冯旰珠姚静崔进王良梅赵水娣张扬
- 关键词：肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶氟喹诺酮类耐药可移动遗传元件
- 新型结核疫苗的研究进展被引量：1
- 2015年
- 结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，积极研发新型结核疫苗十分必要。免疫学、分子遗传学、基因工程、蛋白质组学等技术的突破促进了新型结核疫苗的进展。本文就当今研究开发中的新型结核疫苗的现状作阐述、分类、分析及前景展望。
- 姜明子姚静张耘石刘星冯旰珠
- 关键词：结核疫苗基因重组
